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《昆醫(yī)分生昆醫(yī)分生基因診斷2-PPT課件》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
基因組:生命的藍圖
1未得病先吃藥 基因組醫(yī)學(xué)家Venter博士從自己的基因組看未來發(fā)現(xiàn)有4.1millionDNA變異,3,213,401SNPs22%基因拷貝數(shù)變異發(fā)現(xiàn)有3個心臟病高風(fēng)險基因遺傳自他患病的父親意外發(fā)現(xiàn)還有老年癡呆癥基因(并無家族史!)開始服用statins以及其它降低血液中膽固醇的藥物,以保護心臟和記憶力
2（目前的測序技術(shù)）1984：30億美元測定一個人類基因組1994：3億美元測定一個人類基因組(1:10)2004：3千萬美元測定一個人類基因組(1:100)2007：1百萬美元測定一個人類基因組(1:3000)未來目標(biāo)：1000美元測定一個人類基因組(1:3x106)
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5基因診斷的基本原理:是通過檢測DNA或RNA的結(jié)構(gòu)變化、量的多少及表達功能是否正常，以確定被檢查者是否存在基因水平的異常變化，以此作為疾病確診的依據(jù)?；蛟\斷的臨床意義：在于可以對疾病作出早期、確切的診斷，可以確定個體對疾病的易感性以及疾病的分期分型、療效監(jiān)測、預(yù)后判斷等。近十年來，基因診斷技術(shù)已逐步成為實驗診斷的常規(guī)技術(shù)，基因診斷的原理和技術(shù)已廣泛應(yīng)用于臨床各個學(xué)科領(lǐng)域，包括遺傳學(xué)、傳染病學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、免疫學(xué)以及法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域?；蛟\斷的基本原理
6基因診斷的基本方法①基因突變的診斷；②多態(tài)性分析；③基因表達的檢測；④外源DNA的檢測。
7基因診斷中常用的分子生物學(xué)技術(shù)基因診斷中常用的技術(shù)主要包括：1、核酸分子雜交；2、DNA指紋3、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)；4、單鏈構(gòu)象多態(tài)性檢測(SSCP)；5、限制酶酶譜分析；6、DNA序列測序7、DNA芯片技術(shù)。
8遺傳性疾病基因診斷1.直接診斷直接診斷的前提是被檢測基因必須已被克隆，基因的正常序列和結(jié)構(gòu)已闡明。采用基因突變的診斷方法，通過各種分子生物學(xué)技術(shù)直接檢測導(dǎo)致遺傳性疾病發(fā)生的各種基因突變。2.間接診斷在許多情況下，疾病的致病基因尚未被克隆而無法進行直接診斷，但若致病位點已在基因組中被定位，則可以采用間接診斷策略。即采用多態(tài)性連鎖分析的方法，尋找具有基因缺陷的染色體，并判斷被檢者是否存在該條染色體的缺陷。間接診斷不是尋找DNA的遺傳缺陷，而是通過分析DNA的遺傳標(biāo)記的多態(tài)性來判斷被檢者是否具有帶致病基因的染色體，以判斷被檢者患病的可能性。
9基因診斷在遺傳性疾病中的臨床應(yīng)用血紅蛋白病:包括異常血紅蛋白病、α-地中海貧血和β-地中海貧血；杜氏肌營養(yǎng)不良癥(DMD)；甲型血友病等等。
10感染性疾病的基因診斷感染性疾病是感染了某種病原體而引起的一類疾病。不論病原體是病毒、細菌或寄生蟲，它們都具有特異的基因組。對常見病原體的特異基因或DNA片段的組成特點現(xiàn)在可采用核酸分子雜交技術(shù)，針對病原體特異的核酸序列設(shè)計探針來進行雜交；或應(yīng)用PCR技術(shù)擴增病原體基因的保守序列；或?qū)⒑怂岱肿与s交技術(shù)與PCR技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用。這些方法能夠?qū)Υ蠖鄶?shù)感染性疾病作出明確的病原體診斷，及對潛伏感染或帶菌者作出診斷，并能對病原體進行分類和分型鑒定。
11腫瘤的基因診斷1.檢測腫瘤相關(guān)基因：癌基因、抑癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移基因、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因等基因的突變及表達異常。研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)人類腫瘤如肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、胃癌等癌組織中都存在癌基因和(或)抑癌基因的缺失或點突變等改變，這些改變可作為某些腫瘤的基因標(biāo)志。對癌基因和抑癌基因的檢測，是目前腫瘤基因診斷的一個重要方面。
12基因檢測與腫瘤分子靶向治療
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17Ras基因的研究背景自1982年Dr.RobertA.Weinberg等人發(fā)現(xiàn)人的膀胱癌細胞中有活化的H-ras基因后，引起了人們對ras癌基因在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用的極大關(guān)注。
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19Ras基因?qū)儆贕Tase超家族，它包括三個功能基因：H-ras、K-ras和N-ras，K-ras基因位于人類染色體12p，編碼一種具有GTP酶活性的小G蛋白，分子大小約35kb，是表皮生長因子受EGFR功能信號的下游分子，在膜受體到腺苷環(huán)化酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。ras蛋白通常在以活性的ras-GTP和無活性的ras-GDP兩種結(jié)合狀態(tài)間轉(zhuǎn)化。
2090%的K-ras基因突變位于2號外顯子的第12和13密碼子位點，1%-4%為61和146密碼子突變。
21K-ras基因突變與結(jié)直腸癌的關(guān)系密切K-ras基因的12位密碼子（約82%）是結(jié)直腸癌腫最常見的突變位點。這種k-ras基因催化活性區(qū)的突變，導(dǎo)致RAS蛋白不依賴EGFR/HER受體激活而持續(xù)活化。這種活化突變將造成RAS信號通路的異常，影響細胞的生長，增殖和分化，促進細胞的惡性轉(zhuǎn)化。N-ras突變與P53的作用相似，可抑制細胞的凋亡。K-ras突變可誘導(dǎo)結(jié)腸粘膜的腺上皮過度增生，與腫瘤抑制基因APC聯(lián)合作用促使結(jié)腸癌變K-ras突變可促進腫瘤的惡性進展
22Distributionandfrequencyofk-rasMutationssamplediseaseNo.ofPatients(N_517)mutationrate%bloodpreparation（N:83）positivefamilycancerhistory400negativefamilyhistory320Tumorpatient110Benignlesionpreparation（N:21）chronicatrophicgastritis170Otherbenignlesion40tumortissue(N:413）cancerofcolon303115（37.95％）lungcarcinoma312（6.5％）gastriccarcinoma262（7.7％）carcinomaofgallbladder111（9％）pancreaticcarcinoma22<40%Others201（5％）
232008年6月,CRYSTAL、OPUS等研究在美國臨床腫瘤學(xué)會(ASCO)年會上報道,KRAS基因狀態(tài)與表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑療效有直接的關(guān)系,目前KRAS基因檢測被寫入最新版(2008年第3版)《美國國立癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)(NCCN)結(jié)直腸癌臨床實踐指南》。 ????新指南傳遞給廣大醫(yī)師和患者這樣兩條重要的信息,一是所有轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者都應(yīng)檢測KRAS基因狀態(tài),二是只有KRAS野生型患者才建議接受EGFR抑制劑如西妥昔單抗和帕尼單抗(包括單藥或與化療聯(lián)合)治療。 ????美國喬治敦大學(xué)馬歇爾(Marshall):在結(jié)直腸癌的治療中,“KRAS改變了一切(KRASChangesEverything)!”
24K-ras基因檢測在結(jié)直腸癌診治中的重要性K-ras基因的檢測不僅可以深入了解癌基因的情況，更重要的是篩選出針對抗EGFR靶向治療藥物有效的大腸癌患者，幫助醫(yī)生選擇對腫瘤病人最有效的治療方法，從而真正實現(xiàn)腫瘤病人的個體化治療，還能大幅減少相關(guān)治療費用和毒付作用。目前在歐美大腸癌患者內(nèi)科治療前已經(jīng)常規(guī)檢測K-ras狀態(tài)，并且成為能否報銷相關(guān)抗EGFR治療費用的憑據(jù)。隨著醫(yī)生和病人對個體化治療概念的接受，針對K-ras野生型的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者愛必妥的治療越來越傾向于成為一種標(biāo)準(zhǔn)的手段。自2008年以來，美國臨床腫瘤學(xué)會多次公布數(shù)據(jù)，證實愛必妥對治療K-ras野生型結(jié)直腸癌具有顯著療效，使國際醫(yī)學(xué)界對個體化治療的價值有了更加深刻的認識。
25相關(guān)基因檢測進展亮點APEC-Kras-中國區(qū)中心實驗室北京：第三屆亞洲會議2010.3.28
26K-ras基因檢測的臨床意義《2009年NCCN結(jié)腸癌臨床實踐指南》和《2009年NCCN直腸癌臨床實踐指南》明確指出兩點：一是所有轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者都應(yīng)檢測K-ras基因狀態(tài)；二是只有K-ras野生型患者才建議接受EGFR抑制劑（如西妥昔單抗和帕尼單抗）治療。
27結(jié)直腸癌從此“一分為二”K-ras基因是野生型還是突變型,使傳統(tǒng)意義上的一種疾病被分成兩種獨立的疾病。?K-ras突變型結(jié)直腸癌患者約占40%,這類患者不能從抗EGFR治療中獲益,反而徒增不良反應(yīng)危險和治療費用。而其余60%左右的?K-ras野生型患者就很有可能從這類藥物治療中獲益。
28K-ras基因exon2-codon12G/A(Gly12Asp)野生型突變型
29GeneTest:A“BLACKBOX”?EpidemiologyDiagnosisandTreatmentMolecularGenetic
30Thankyou!
