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《親水支架細(xì)胞培養(yǎng)的染色方法.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國科技論文在線http://www.paper.edu.cn#親水支架細(xì)胞培養(yǎng)的染色方法**皮彥斌，孟慶陽，敖英芳（北京大學(xué)第三醫(yī)院運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究所，北京，1000191）5摘要：目的：發(fā)現(xiàn)一種檢測親水支架上細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)的方法。方法：將待檢測細(xì)胞接種到親水支架上進(jìn)行培養(yǎng)，至待檢測細(xì)胞在親水支架上的生長融合率為90%-95%時(shí)，獲得支架-細(xì)胞復(fù)合體系。采用吖啶橙染色液對支架-細(xì)胞復(fù)合體系進(jìn)行熒光染色，并采用磷酸緩沖鹽溶液對染色后的支架-細(xì)胞復(fù)合體系進(jìn)行洗滌。將洗滌后的支架-細(xì)胞復(fù)合體系置于激光掃描共聚焦顯微鏡下，并利用綠色熒光通道和橙色熒光通道進(jìn)行觀10察，從而檢測得到親水支架上細(xì)胞的培養(yǎng)狀態(tài)。
2、結(jié)果：通過這種方法，激光共聚焦顯微鏡下的細(xì)胞分布情況顯示十分清晰，不存在親水支架對熒光染色液的吸附所造成的干擾，使得細(xì)胞的分布及生長狀態(tài)的分析更加直觀及準(zhǔn)確。結(jié)論：本研究提供的方法能夠清晰、準(zhǔn)確地檢測親水支架上細(xì)胞的分布情況及生長狀態(tài)，可以對親水支架上的細(xì)胞進(jìn)行無損、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)地檢測。且操作簡便，便于規(guī)?；茝V應(yīng)用。關(guān)鍵詞：吖啶橙染色，激光共聚焦顯微鏡，親水支架15中圖分類號：Q813.1+1AmethodtodetectcellularculturestateonthehydrophilicscaffoldPIYanbin,MENGQingyang,AOYingfang20(Institut
3、eofSportsMedicine,PekingUniversityThirdHospital,Beijing,1000191)Abstract:Purpose:inpresentstudy,amethodwasintroducedfordetectingthestateofcellsculturedonthehydrophilicscaffold.Methods:stemcellswereculturedonahydrophilicscaffoldtobuildacell-scaffoldcomplexwithaconfluenceof90-95%.Thefluorescencestaini
4、ngofcell-scaffoldcomplexwasproducedbyacridineorangestaining,andrinsedbyphosphatebuffersolution(PBS)toerasethe25overdoesacridineorangefluorescencedyes.Afterfluorescentstaining,thecell-scaffoldcomplexwasobservedundergreenandorangechannelsofconfocalfluorescencemicroscope.Result:thestateofculturedcellsc
5、ouldbedisplayedclearlyandpreciselywithouttheinterferenceofunintendedstainingonhydrophilicscaffold..Conclusion:bythismethod,Thedistributionandgrowthstateofcellonthescaffoldcanbemeasuredeasily.30Keywords:Acridineorangefluorescencedyes;Confocalfluorescencemicroscope;Hydrophilicscaffold0引言35組織工程支架是一種用于修
6、復(fù)、維護(hù)、促進(jìn)人體各種組織或器官損傷后的功能和形態(tài)的生物替代物，它可以為細(xì)胞的生長輸送營養(yǎng)及排泄代謝產(chǎn)物，并為細(xì)胞的增殖和分化提供結(jié)構(gòu)支撐和空間。為了獲知組織工程支架的作用效果，在利用組織工程支架進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要對組織工程支架上所培養(yǎng)細(xì)胞的分布、生長和增殖等培養(yǎng)狀態(tài)進(jìn)行檢測。因此，有必要提供一種簡單易行、清晰準(zhǔn)確的檢測組織工程支架上細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)的方法。目前，現(xiàn)有技術(shù)40通常采用熒光染料對細(xì)胞中的某些特定成分（如DNA、RNA等）進(jìn)行標(biāo)記，通過激光掃描共聚焦顯微鏡對細(xì)胞中熒光標(biāo)記的特定成分發(fā)出的熒光進(jìn)行觀測，從而了解細(xì)胞在組織工程支架上分布、生長和增殖情況。但是，現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下問題：當(dāng)
7、組織工程支架為親水性基金項(xiàng)目：教育部新教師基金（20130001120101）作者簡介：皮彥斌（1979年-），男，主治醫(yī)師/助理研究員，運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷，軟骨組織工程通信聯(lián)系人：敖英芳（1958年-），男性，教授，博導(dǎo)，關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷，軟骨組織工程.E-mail:aoyingfang@163.com-1-中國科技論文在線http://www.paper.edu.cn時(shí)，其非特異性吸附熒光染料，造成親水性組
