膜結(jié)晶法結(jié)晶蛋白質(zhì)的研究碩士論文

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1、北京化工大學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名：趟變?nèi)掌冢宏P(guān)于論文使用授權(quán)的說明-’／弦／’6．學(xué)位論文作者完全了解北京化工大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬北京化工大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)

2、送交論文的復(fù)印7件和磁盤，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全●部或部分內(nèi)容，可以允許采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密論文注釋：本學(xué)位論文屬于保密范圍，在世解密后適用本授權(quán)書。非保密論文注釋：本學(xué)位論文不屬于保密范圍，適用本授權(quán)書。作者躲弛李導(dǎo)師簽名：§b：日期：蛔：受：壘學(xué)位論文數(shù)據(jù)集中圖分類號Q814．9學(xué)科分類號Q78論文編號100l020070125密級學(xué)位授予單位代碼100lO學(xué)位授予單位名稱北京化工大學(xué)作者姓名張新妙學(xué)號2004080l25獲學(xué)位專業(yè)名稱生物化工獲學(xué)位專

3、業(yè)代碼081703課題來源國家自然科學(xué)基金研究方向生物化工論文題目膜結(jié)晶法結(jié)晶蛋白質(zhì)的研究關(guān)鍵詞結(jié)晶，蛋白質(zhì)，微孔疏水膜，跨膜通量，結(jié)晶條件，沉淀劑，添加劑論文答辯日期．．：．，2007．6．3·論文類、型，。2：r，～t學(xué)位論文評閱及答辯委員會情況姓名職稱工作單位學(xué)科專長指導(dǎo)教師馬潤字教授北京化工大學(xué)膜分離評閱人1200700126評閱人2200700127評閱人3200700128評閱人4200700129評閱人5200700130徽員蝴吳光夏研究員中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境中心膜分離答辯委員1吳光夏研究員中國科學(xué)院生

4、態(tài)環(huán)境中心膜分離答辯委員2萬印華研究員中國科學(xué)院過程工程研究所膜分離答辯委員3徐家立研究員中國科學(xué)院微生物研究所微生物答辯委員4陳勁春教授北京化工大學(xué)生物化工答辯委員5袁其朋教授北京化工大學(xué)生物化工注：一．論文類型：1．基礎(chǔ)研究2．應(yīng)用研究3．開發(fā)研究4．其它二．中圖分類號在《中國圖書資料分類法》查詢．，三．學(xué)科分類號在中華人．民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)(GB／_T137v45-9)j《學(xué)科分類與代碼》中查詢．?·：·，<、’：!‘；’?≥，·z：：_『?！?“?！?。4四．論文編號由單位代碼和年份及學(xué)號的后四位組成．’’．．

5、～●．，：：。＼J—●■了{(lán)摘要膜結(jié)晶法結(jié)晶蛋白質(zhì)的研究隨著重組DNA技術(shù)的發(fā)展和表達(dá)體系的完善，已知的蛋白質(zhì)數(shù)目有了很大增長。X射線衍射是確定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的最有效方法，而X射線結(jié)晶學(xué)的應(yīng)用要求大分子晶體具有足夠大的尺寸(大于0．1mm)和完美的質(zhì)量，以獲得精確的衍射數(shù)據(jù)。然而，許多生物大分子晶體常常難以成長，一般小分子結(jié)晶的方法都不適合于大分子的晶體生長。因此，獲得質(zhì)量完美的蛋白質(zhì)晶體成為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)測定的主要瓶頸，需要探索新的結(jié)晶方法以制備蛋白質(zhì)等生物大分子晶體。用膜結(jié)晶技術(shù)結(jié)晶蛋白質(zhì)可得到適合于衍射分析的大分子蛋

6、白質(zhì)晶體。本文首先用滲透膜結(jié)晶法進(jìn)行了幾種蛋白質(zhì)(溶菌酶、木瓜蛋白酶、卵清蛋白、牛血清白蛋白以及脂肪酶)的膜結(jié)晶，研究了操作條件對蛋白質(zhì)滲透膜結(jié)晶過程的影響，優(yōu)化了幾種蛋白質(zhì)的結(jié)晶條件，評價了不同結(jié)晶條件下的溶劑跨膜通量，探討了沉淀劑和添加劑對蛋白質(zhì)滲透膜結(jié)晶的作用機(jī)理，并對最后得到的蛋白質(zhì)晶體進(jìn)行了初步分析。研究結(jié)果表明：對于溶菌酶的滲透膜結(jié)晶過程，氯化鈉和硫氰酸鈉為溶菌酶滲透膜結(jié)晶的有效沉淀劑。結(jié)晶溶液中加入一定添加劑如丙三醇、PEG4000或PEG6000等，可以有效提高溶劑跨膜通量，改善晶體質(zhì)量，促進(jìn)晶體成

7、核及生長，得到質(zhì)量更完美的晶體。對于溶菌酶的動態(tài)滲透膜結(jié)晶，溶菌酶濃度對溶菌酶的動態(tài)滲透l北京化工火學(xué)博士學(xué)位論文膜結(jié)晶過程有重要影響。過高的溶菌酶濃度使得結(jié)晶溶液中出現(xiàn)大量粒狀沉淀，晶體質(zhì)量和產(chǎn)率下降，溶劑跨膜通量較低；然而溶菌酶濃度太低，結(jié)晶時間較長。一般來說，溶劑跨膜通量隨著蛋白質(zhì)濃度的升高而降低。在研究的溶菌酶濃度范圍內(nèi)，20-30mg／mL，尤其是20mg／mLl拘溶菌酶濃度，更適合于溶菌酶的動態(tài)滲透膜結(jié)晶，在此濃度下，能有效控制結(jié)晶溶液中晶核的數(shù)量，得到的晶體尺寸較大，并且結(jié)晶時間不至太長。沉淀劑氯化鈉

8、濃度對溶菌酶的動態(tài)滲透膜結(jié)晶過程也有重要影響。將沉淀劑濃度從4％提高到6．5％(wt／voO，結(jié)晶誘導(dǎo)時問縮短；進(jìn)一步升高沉淀劑濃度到9％，則又使得結(jié)晶誘導(dǎo)時間延長，溶劑跨膜通量降低。當(dāng)沉淀劑濃度大于9％時，結(jié)晶溶液中出現(xiàn)大量沉淀。對于溶菌酶的動態(tài)滲透膜結(jié)晶，4~6．5％的沉淀劑濃度是最佳的沉淀劑濃度范圍。對于20mg／mL的溶菌酶，在4％的氯化鈉濃度下，洗