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1、布魯氏菌的血清學檢測方法張國慶1.2新燕1韓敏2布魯氏菌病(簡稱布病)是一種人獸共患的傳染病，世界范圍內流行。布病給人造成了大量損失和痛苦。近年由于布病的散發(fā)病例的增多，患者多無明確接觸史，臨床癥狀乂不典型，因此其實驗室檢測至關重要。目前布氏菌的實驗室檢測主要分三類：布氏菌細菌學檢測、血清學檢測和分子生物學檢測。細菌學檢測周期長、陽性率低、感染風險高等特點，分子生物學對儀器、人員、技術的要求較高使得這兩類技術在臨床診斷應用上不是很普遍，應用最多的還是布氏菌的血清學檢測。木文現(xiàn)就布氏菌的血清學的檢測進行如下綜述。布氐菌血清學方法可以分為
2、：凝集法、補體結合法、酶聯(lián)免疫吸附試驗法、熒光偏振法、膠體金層析法等。其中凝集法是通過特異性抗體與顆粒性抗原結合產(chǎn)生凝集的血清學實驗，現(xiàn)應用最多的為虎紅平板凝集實驗、試管凝集實驗、二巰基乙醇試管凝集實驗、抗人球蛋白抗體實驗等?；⒓t平板凝集實驗(RBPA)其抗原系用抗原性良好的牛種布氏菌株在適宜培養(yǎng)基上培養(yǎng)收獲菌體，經(jīng)加熱滅活，離心后用虎紅染料染色，懸浮于乳酸緩沖液(PH3.6-3.7)制成。它能抑制非特異性反應的IgM和增強特異性IgG的活性，其反應敏感穩(wěn)定，特異性優(yōu)于試管凝集實驗。因此PBPA在很多國家推廣使用，是我國常規(guī)的診斷方法
3、之一。RBPA操作簡單，不需要大型精密的儀器，適合基層醫(yī)療機構和檢測點應用。因有很高的靈敏性且能在短時間內完成，RBPA常用于初篩實驗。其有很高的準確性，特別是當檢測1:4稀釋血清標木陽性時其診斷的特異性更高【1】。但RBPA也有局限性，纖維蛋白原可與虎紅染料發(fā)生非特異性結合形成假陽性【2】，急性病人早期，體內產(chǎn)生的抗體以IgM為主，RBPA可能檢測為陰性。試管凝集實驗(SAT)又稱萊特試驗是1897年由Wright發(fā)明，其方法簡便，特異性強，可半定量檢布魯氏菌抗體滴度，因此旮很高的診斷價值，至今在臨床上廣泛使用。我國布病診斷標準中當
4、SAT滴度≥l:100可確診是活動性布病。SAT在臨床中能相對準確的反應病情的變化，在疾病的潛伏期時SAT滴度常100,當患者出現(xiàn)發(fā)熱等體征后滴度急劇上升，經(jīng)過治療后滴度又會降低，常用于布病的臨床治療和病情的監(jiān)測。但SAT也會由于布氏菌發(fā)生了變異或抗體過高發(fā)生前帶現(xiàn)象而使檢測結果呈假陰性，該方法還與結腸耶爾森菌0:9產(chǎn)生的抗體以及體內某些自身抗體發(fā)生假陽性。也有臨床上布病己經(jīng)治愈，但兩三年后SAT滴度依然很高【3】，所以SAT結果應結合蘇他結果以及患者的臨床癥狀綜合分析。二巰基乙醇試管凝集實驗（2-ME）是通過化合物中的巰基使人
5、分子的IgM抗體的雙硫鍵破壞，IgG抗體不受影響，所以2-ME實驗主要檢測的是布病患者血清中的IgG。該方法主要用于鑒別人工免疫及自然感染，在一定程度還可以排除某些與布病有交叉反應的疾病。我們認為在布病的急性期或慢性感染的活動期體內以IgM為主，而在慢性感染的非活動期或接種疫苗的機體中以IgG為主,2-ME是區(qū)分二者效果較好的實驗。但2-ME操作與SAT-樣較為繁瑣，不適合布病的大規(guī)模篩査。抗人球蛋白抗體實驗（coombs’test）又稱不完全抗體實驗，在一些特殊或復雜的布病患者機體中查不到完全抗體的存在，可通過檢測布魯氏
6、菌的coombs’test實驗陽性而確診，是SAT實驗的一個補充。國家標準中認為coombs’test滴度≥l:200可確診布魯菌感梁。半抗體檢測主要是IgG、IgA的不完全成分，其檢測結果與疾病的機體狀態(tài)、病程所處吋期、治療效果都有一定關系。對特殊或復雜的布病的診斷很冇意義。但該實驗要求對檢測標本做反復洗滌，操作復雜，吋間長，而且還要有一定的設備，所以不適合大批量標本的檢測。補體結合實驗（CFT）在國際貿易中被指定用于羊、牛、綿羊附睪種的布魯氏菌的確診實驗，其原理是根據(jù)布魯氏菌的抗原抗體反應消耗補體從而
7、不能使指示系統(tǒng)（綿羊紅細胞和溶血素）產(chǎn)生溶血而設計的。艽檢測的特異性強，有國際標準，方便各國操作，所以受到各國貿易的青睞。我國也把CFT作為人布病的診斷標準之一，但由于其操作復雜，所要求試劑種類多，敏感性不高，對實驗人員和設備均有一定的要求，所以臨床上應用不多。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)自1976年Cavleson最先把這項技術運用到檢測牛布病抗體以來，EUSA方法以蘇高靈敏、高特異、操作簡便且可大批篩查得到了人們認可。該方法主要分間接法(i-ELISA)和競爭法(c-ELISA),二者各有其特點。i-ELISA法敏感性較高，c-
8、ELISA法則特異性更好。ELISA法與與CFT檢測效果相當，但操作更方便II可檢測血清和乳汁，2004年該法作為國際貿易中牛種和豬種布氏菌的指定試驗。EUSA法檢測布氏菌抗體的能力取決于反應孔中所包被的抗原成分，0前包
