觀察parkin對阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因果蠅模型的保護(hù)作用

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1、觀察parkin對阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因果蠅模型的保護(hù)作用　　阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一種最常見的老年癡呆類型，其特征性病理學(xué)改變主要為Tau蛋白、β淀粉樣蛋白的沉積等。該疾病的臨床表現(xiàn)主要為進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙，可伴有震顫麻痹和肌萎縮等帕金森相關(guān)癥狀。有研究報(bào)道，Tau蛋白相關(guān)疾病的患者伴有帕金森疾病相關(guān)蛋白parkin的突變。parkin蛋白由PARK2基因編碼，具有E3泛素－蛋白連接酶活性，泛素－蛋白酶體系統(tǒng)通過處理喪失正常功能的蛋白質(zhì)從而作為細(xì)胞質(zhì)量的控制系統(tǒng)。該研究探討parkin對AD的作用，

2、采用遺傳干預(yù)使dparkin在ninaE-GAL4/UAS系統(tǒng)的AD轉(zhuǎn)基因果蠅模型視X膜光感受神經(jīng)元中表達(dá)，觀察parkin對AD轉(zhuǎn)基因果蠅模型是否具有保護(hù)作用，并進(jìn)一步驗(yàn)證這種保護(hù)作用是否與線粒體分裂基因Drp1有關(guān)。　　1材料與方法　　1．1材料果蠅品系:UAS-dparkin、ington果蠅中心;模型UAS-hTauR4063/TM6由中南大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)?！　?．2方法　　1．2．1果蠅雜交　　1．2．1．1構(gòu)建u;lHCLO4，研磨完成后在離心機(jī)用3500r/min離心15min，取上清液，緩慢加入0.2mol/LKOH，調(diào)

3、節(jié)樣品pH至7．5，運(yùn)用離心機(jī)3500r/min，離心15min，取上清液至新的EP管中，樣品制備成功;將樣品在高效液相色譜儀上進(jìn)行果蠅樣品ATP值檢測。該試驗(yàn)重復(fù)至少3次?！　?．3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以珋x±s表示，采用配對t檢驗(yàn)分析?！　?結(jié)果　　2．1dparkin對AD轉(zhuǎn)基因果蠅模型的影響正常對照組果蠅復(fù)眼結(jié)構(gòu)完整，紋路清晰。AD轉(zhuǎn)基因果蠅模型復(fù)眼外形不規(guī)則，紋路消失，面積較前者明顯減小，見圖1。dparkin對疾病模型干預(yù)后，果蠅復(fù)眼較模型呈現(xiàn)明顯的好轉(zhuǎn)，復(fù)眼面積明顯增大，紋路較清晰，見圖2。A

4、D轉(zhuǎn)基因果蠅模型與正常對照組比較，其ATP濃度明顯降低，見圖3。dparkin干預(yù)疾病模型后，其ATP水平較前者明顯升高。見圖4?！　?．2Drp1RNAi干預(yù)后，dparkin對AD轉(zhuǎn)基因果蠅模型的影響Drp1RNAi干預(yù)后，dparkin對AD轉(zhuǎn)基因果蠅模型的神經(jīng)變性抑制作用減弱，出現(xiàn)。　　3討論　　AD是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，據(jù)統(tǒng)計(jì)，在全部癡患者中，AD占一半及以上，已嚴(yán)重影響了患者的身心健康和生活質(zhì)量。由于該病的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，所以臨床上亦無特效治療藥物。目前國內(nèi)外對AD研究熱點(diǎn)主要集中在:β-淀粉樣蛋白、Tau蛋白

5、。Tau蛋白是微管相關(guān)蛋白(microtubuleassociatedproteins，MAPs)的組分之一，MAPs與微管蛋白組成微管，后者是神經(jīng)元骨架蛋白的重要成分，參與胞體和軸突營養(yǎng)的輸送。而AD患者腦中的Tau蛋白則異常過度磷酸化，并使其喪失正常生理功能?！　∪祟惖腡au蛋白有很多突變位點(diǎn)，其中突變頻率最高的為R4063后，與疾病模型組比較，ninaE-GAL4/UAS-dpar-kin;UAS-hTauR406W/+果蠅復(fù)眼結(jié)構(gòu)比較完整，復(fù)眼面積有所增大，紋路較清晰，且ATP值增高。　　另外，parkin的作用多樣，如在各種應(yīng)激中par-ki

6、n阻止了細(xì)胞的凋亡;parkin被認(rèn)為通過自噬調(diào)控著線粒體的功能;parkin可以介導(dǎo)線粒體的分裂等。且過度磷酸化的Tau蛋白可以通過線粒體分裂蛋白Drp1在體內(nèi)的錯(cuò)誤定位而促進(jìn)神經(jīng)元的變性，線粒體的功能異常被認(rèn)為與AD等相關(guān)的神經(jīng)變性型疾病有關(guān)。有研究表明，Tau蛋白的過度磷酸化可以導(dǎo)致果蠅和老鼠體內(nèi)線粒體的延長，進(jìn)而導(dǎo)致線粒體功能紊亂，以及細(xì)胞的死亡。本研究顯示將Drp1敲除后，dparkin對AD轉(zhuǎn)基因果蠅模型的保護(hù)作用明顯減弱?？梢?，上述研究parkin對AD轉(zhuǎn)基因果蠅模型具有的神經(jīng)保護(hù)作用可能與線粒體分裂蛋白Drp1有關(guān)。而這種保護(hù)的確切機(jī)制

7、還需進(jìn)一步研究。