wortmannin對重癥急性胰腺炎大鼠肺損傷的保護(hù)作用

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1、wortmannin對重癥急性胰腺炎大鼠肺損傷的保護(hù)作用【摘要】目的：觀察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制劑annin對重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠肺損傷的保護(hù)作用并探討其機(jī)制.方法：將健康成年SD大鼠54只隨機(jī)分為對照組、SAP組和SAP＋annin組，每組18只，逆行膽胰管注射50g/L?；悄懰徕c制備SAP模型.檢測血清TNFα水平、肺組織濕/干質(zhì)量比值、肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性、支氣管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量；觀察肺組織及胰腺組織的病理變化.結(jié)果：SAP組較對照組血清TNFα水平、肺組織濕

2、/干質(zhì)量比值、BALF蛋白含量及肺組織MPO活性均顯著升高（P<0.01），胰腺、肺組織病理損傷隨病情進(jìn)展而逐漸加重；SAP＋annin組較對照組各項(xiàng)指標(biāo)均升高，但較SAP組均明顯降低（P<0.01），胰腺、肺組織病理損傷較SAP組減輕.結(jié)論：annin對SAP大鼠肺損傷有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與其抑制了中性粒細(xì)胞內(nèi)PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，使多種炎癥細(xì)胞的活化和TNFα等炎癥因子的釋放受到抑制有關(guān).【關(guān)鍵詞】重癥急性胰腺炎annin中性粒細(xì)胞磷脂酰肌醇3激酶肺/損傷　　0引言　　重癥急性胰腺炎

3、（severeacutepancreatitis,SAP）占急性胰腺炎病例的10％～25％，病死率高達(dá)20%～30%，除導(dǎo)致胰腺病變外，肺是最早受累的器官之一，從低氧血癥到急性呼吸窘迫綜合癥［1］（ARDS）均可出現(xiàn)，其發(fā)生機(jī)制是由于胰腺腺泡細(xì)胞受損后血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等活化，釋放大量的化學(xué)因子和細(xì)胞因子，造成肺毛細(xì)血管和肺泡上皮細(xì)胞損害［2］.annin是磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的抑制劑，可抑制中性粒細(xì)胞的募集和活化，從而減少炎癥因子的釋放，annin能否減輕SAP過程

4、中的肺損傷，目前文獻(xiàn)報(bào)道甚少.我們通過annin對大鼠的預(yù)處理，來觀察其對SAP時(shí)肺損傷的保護(hù)作用.　　1材料和方法　　1.1材料　　annin（Sigma公司）；?；悄懰徕c（Sigma公司），溶于9mL/L生理鹽水，終濃度50g/L；大鼠TNFαELISA試劑盒（晶美生物工程公司）；雌性SD大鼠54只（第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），體質(zhì)量220～270g.UV7504型紫外可見分光光度計(jì)（上海精密儀器儀表有限公司）.　　1.2方法　　1.2.1動(dòng)物分組　　將SD大鼠隨機(jī)分為3組：對照組、SAP組和SAP＋ann

5、in組，每組18只，每組又分為術(shù)后3，6，12h組，每組6只.　　1.2.2模型建立　　大鼠術(shù)前12h禁食，自由飲水.用10g/L戊巴比妥鈉以30mg/kg腹腔注射.取上腹部正中切口，顯露胰腺，確認(rèn)膽胰管，動(dòng)脈夾夾閉其遠(yuǎn)端（靠近十二指腸）、近端（左右肝管匯合處）；SAP組用1mL注射器針穿刺貼近膽胰管十二指腸開口處膽管，以0.2mL/L的速度勻速逆行注入50g/L?；悄懰徕c（0.8mL/kg），注射完畢后動(dòng)脈夾繼續(xù)夾閉膽胰管3～4min，以使?；悄懰徕c充分進(jìn)入胰腺，關(guān)腹.對照組給予等量生理鹽水注入，SAP＋anni

6、n組于建模前給予annin1.4mg/kg，ip［3］，對照組和SAP組給予等量對應(yīng)溶劑.　　1.2.3標(biāo)本收集　　分別于建模后3，6，12h每組處死6只大鼠，門靜脈取血，觀察胰腺大體病理改變，并留取胰腺組織，40mL/L多聚甲醛固定，待病理切片；解剖胸腔暴露肺，觀察肺大體病理改變.做右側(cè)肺支氣管肺泡灌洗，灌洗液收集后待測蛋白含量；取小塊左下肺組織，迅速置入凍存管-80℃凍存，待測MPO活性；另取一小塊左下肺葉組織，40mL/L多聚甲醛液固定，待病理切片檢查.　　1.2.4血清TNFα含量測定　　門靜脈取血，置室溫

7、下1h，待樣本完全凝固后以2500r/min速度離心15min，吸取上清，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明測定3，6，12h血清TNFα含量.　　1.2.5肺組織濕/干質(zhì)量（PO活性檢測　　取左肺組織約100mg，加5g/L溴化十六烷基三甲胺（HTAB）1mL制備勻漿，反復(fù)凍融3次并超聲粉碎(10s，3次)，4℃，3000r/min離心30min，取上清0.1mL加入鄰聯(lián)二茴香胺緩沖液2.9mL，保持溫度于25℃，立即在分光光度計(jì)460nm波長下進(jìn)行2min的掃描，記錄第30s和第90s的吸光度差值，以此1min內(nèi)吸

8、光度的變化代表酶活力的改變，MPO活力單位(U/g)=(ΔA460nm/min)/11.3×(g/L).其中，g為所加組織量，L為反應(yīng)液.　　1.2.8病理形態(tài)學(xué)觀察　　對胰腺組織、肺組織常規(guī)石蠟包埋，4μm切片，HE染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察病理改變.　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:使用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s表示，各組血清TNFα,肺PO活性比