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《垂盆草總黃酮的保肝降酶作用及其化學(xué)成分的鑒別研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、垂盆草總黃酮的保肝降酶作用及其化學(xué)成分的鑒別研究【摘要】目的進(jìn)一步驗證垂盆草總黃酮的保肝降酶作用，鑒別并確證垂盆草總黃酮的化學(xué)組成，為垂盆草藥材質(zhì)量控制指標(biāo)的確認(rèn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究奠定基礎(chǔ)。方法通過CCl4造模，考察垂盆草總黃酮對小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶的影響及對肝臟的保護(hù)作用。采用HPLC法，通過與各對照品對照，確證垂盆草總黃酮的化學(xué)組成。結(jié)果垂盆草總黃酮能顯著降低小鼠血清ALT和AST，并對肝臟有明顯的保護(hù)作用;垂盆草總黃酮中至少含有槲皮素、山柰素、木犀草素等8種黃酮類化合物。結(jié)論垂盆草總黃酮是垂盆草中重要的保肝降酶活性部位之一，垂盆草總黃酮中至少含有槲皮素、山
2、柰素、木犀草素等8種黃酮類化合物。這為確認(rèn)垂盆草藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)以及制定科學(xué)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了基礎(chǔ)?！娟P(guān)鍵詞】垂盆草;總黃酮;保肝降酶;高效液相色譜法 垂盆草是景天科植物垂盆草SedumsarmentosumBunge的新鮮或干燥全草，味甘、淡，性涼，具有清熱解毒、利尿消腫之效，主治急、慢性肝炎?；瘜W(xué)研究表明，垂盆草主要含有糖類、黃酮類、三帖類及苷類成分。為配合垂盆草藥材活性成分的篩選、指標(biāo)成分的確認(rèn)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂，在垂盆草不同提取部位保肝降酶試驗的基礎(chǔ)上，我們對分離、純化到的垂盆草總黃酮進(jìn)行了進(jìn)一步的保肝降酶驗證實驗，并對其中的主要化學(xué)成分進(jìn)行了鑒別
3、確證。現(xiàn)將方法和結(jié)果報道如下?！ ?儀器與材料 Agilent1100高效液相色譜儀，G1314A紫外檢測器，G1313A自動進(jìn)樣系統(tǒng)，CAGBootp色譜工作站;日本島津LC-10ADVP高效液相色譜儀，島津SPD-10AVP紫外檢測器，H2145型石蠟切片機(jī);LEICATR1020型組織處理儀;RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;LXJ-IIB型大容量多管離心機(jī)等?！ LT試劑盒(批號：20071112)、AST試劑盒(批號：20071112)均購自南京建成生物技術(shù)研究所;石蠟、蘇木素、伊紅及中性樹脂等由南京中醫(yī)藥大學(xué)形態(tài)學(xué)教研室提供;甲醇、乙腈等試劑為色
4、譜純，四氯化碳、乙醇、正丁醇、醋酸乙酯、甲醛等試劑為分析純，均購自上海久億化學(xué)試劑有限公司;硅膠G由青島海洋化工廠生產(chǎn)(供薄層層析用);生理鹽水(批號：2007092502)購自南京小營制藥有限公司。垂盆草總黃酮(純度92.2%，比色法測定)自制?！ ￠纹に貙φ掌?批號：760701)，山柰素對照品(批號：0861-200002)，異鼠李素對照品(批號：0860-200103)，木犀草素對照品(批號：111520-200201)，金絲桃苷對照品(批號：1521-200202)，木犀草苷對照品(批號：1192-061019)，蘆丁對照品(批號：086-93
5、03)，槲皮苷對照品(批號：235-2003012)，甘草苷對照品(批號：200522)均購自中國藥品生物制品檢定所;5，4′-二羥基-3′，5′-二甲氧基黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(苜蓿苷)、5，4′-二羥基-8，3′-二甲氧基黃酮-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、異鼠李素-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷均為自制品(經(jīng)結(jié)構(gòu)確證和歸一化法純度測定)。昆明種小鼠(體質(zhì)量18～22g，雌雄各半)由南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供?！ ?方法和結(jié)果 2.1垂盆草總黃酮的保肝降酶實驗[1～6] 2.1.1供試藥物溶液的制備稱取總黃酮粉末3.8737g(
6、相當(dāng)于200g生藥)，加0.5%羧甲基纖維素鈉溶液至100ml，制成每毫升相當(dāng)于2g生藥的溶液。 2.1.2劑量設(shè)計根據(jù)垂盆草藥材的臨床人用劑量，折算成小鼠劑量，取其5倍量、10倍量作為小鼠的給藥劑量(經(jīng)過預(yù)試驗確定)，即高劑量50g(生藥)/kg，低劑量25g(生藥)/kg，再由總黃酮得率換算成供試藥物溶液的給藥量?！ ?.1.3動物分組共分為正常對照組、模型對照組和垂盆草總黃酮高、低劑量組共4組，每組10只小鼠，雌雄各半。給藥組給予相應(yīng)劑量的供試藥物，正常對照組和模型對照組給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液(20ml/kg)?！ ?.1.4給藥方法及肝
7、損傷模型的制備各組動物定時按劑量灌胃，1次/d，給藥6d，第1次給藥前禁食不禁水24h。末次給藥1h后，除正常對照組小鼠腹腔注射花生油(10ml/kg)外，其余各組小鼠均腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液(10ml/kg)，注射后正常給食給水?！ ?.1.5轉(zhuǎn)氨酶測定腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液16h后，小鼠眼眶后靜脈叢取血，置37℃水浴中30min，取出，以2000r/min離心10min，分離血清，采用賴氏法測定ALT和AST活性。結(jié)果見表1。取血同時，取肝組織固定于10%甲醛溶液中，供做組織切片用。表1垂盆草總黃酮對血清中ALT及AST的影響
8、 2.1.6肝臟病理切片檢查取固定于10%甲醛溶液中的小鼠肝臟，按常規(guī)制備病理
