資源描述：
《青蒿琥酯抑制人結腸癌sw620細胞侵襲的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在應用文檔-天天文庫。
1、青蒿琥酯抑制人結腸癌SW620細胞侵襲的研究作者：范鈺，張尤歷，姚廣濤，李儀奎【摘要】 目的觀察中藥提取物青蒿琥酯（artemisunate，ART）對結腸癌細胞侵襲的作用，并探討其可能機制。方法采用不同濃度的青蒿琥酯處理結腸癌S-1)蛋白變化。結果青蒿琥酯能有效地抑制結腸癌細胞S-1基因蛋白表達，呈時間和濃度依賴性（P<0.01）。結論青蒿琥酯可明顯抑制結腸癌S-1蛋白水平有關?！娟P鍵詞】青蒿琥酯；結腸腫瘤；錨著不依賴性增殖；細胞間黏附分子 Abstract：ObjectiveTostudytheeffec
2、tsandmechanismofArtemisunateonhumancoloncancer.MethodsAftercoloncancerS-1)isunatecouldsignificantlyinhibitbothinvasionabilityandanchorageindependencegroanner.ThelevelofprotEInofICAM-1isunatecaninhibitinvasionofcoloncarcinomacelllineS-1)是體內重要的免疫活性分子，與腫瘤侵襲轉移具有密切的關
3、系［2，3］。為此，本研究采用ART處理結腸癌S-1蛋白表達的影響，以探討其抗癌機制?！ ?材料與方法 1.1材料 青蒿琥酯，廣西桂林第二制藥廠產品，用0.5%NaHCO3溶解后再用生理鹽水配置成所需濃度。RPMI1640、新生小牛血清，購自GIBCO公司。人結腸癌細胞株S-1單克隆抗體購自SantaCruz公司。 1.2細胞培養(yǎng) 人結腸癌SI1640液中培養(yǎng)，置37℃，50ml/LCO2培養(yǎng)箱中。每日觀察，待細胞至對數(shù)生長期，采用不同濃度的青蒿琥酯處理后，然后準備進行以下實驗。 1.3軟瓊脂集落培養(yǎng)實驗
4、1.3.1制備細胞懸液 將處理組及對照組細胞用含0.01%EDTA的0.25%胰酶消化，制備單細胞懸液，調整細胞濃度為2×103細胞/ml，置室溫備用?！ ?.3.2制備底層瓊脂 將1%的瓊脂凝膠于微波爐完全溶化后放置45℃水浴中，溫度平衡后與等體積45℃預溫的漢20%新生小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液混勻，加入6孔板中，每孔4ml，置超凈臺中室溫放置，令其充分凝固。剩余的瓊脂粉/培養(yǎng)基混合物置于42℃水浴中待用。 1.3.3制備上層瓊脂取42℃保溫的瓊脂粉/培養(yǎng)基混合物1.2ml與0.8ml細胞懸液混合，迅速
5、混勻，取1ml鋪于底層瓊脂上，每個樣品三復孔。同時做空白陰性對照及溶劑對照。置培養(yǎng)板于超凈臺室溫待其充分凝固后，移入37℃，5%，CO2孵箱中培養(yǎng)14d?！ ?.3.4計數(shù)倒置顯微鏡下隨機計數(shù)每組樣品10個視野中的集落數(shù)，取其平均數(shù)作比較。結果采用方差分析。 1.4體外侵襲抑制實驗 該實驗在改良的Boyden小室中操作，根據 2結果 2.1ART對結腸癌細胞軟瓊脂集落形成的影響 結腸癌S.編輯?！ ?.3ART對結腸癌細胞ICAM-1基因表達的影響 本研究采用-1蛋白水平的影響。結果發(fā)現(xiàn)，ART各個劑量
6、組在作用細胞24h后，ICAM-1蛋白表達就開始出現(xiàn)降低；隨著作用時間的延長，ICAM-1蛋白降低更加明顯，到72h時非常顯著。同時發(fā)現(xiàn)，ICAM-1蛋白水平降低與ART作用濃度密切相關。見圖3。 3討論正常真核細胞，除成熟血細胞外，大多須粘附于特定的細胞外基質上才能抑制凋亡而存活，稱為錨著依賴性（anchoragedependence）。一般認為，腫瘤細胞在軟瓊脂形成集落的多少可反映腫瘤細胞錨著不依賴性增殖的特性，且與其惡性程度呈正相關。癌細胞侵襲能力強，則在軟瓊脂上形成的集落數(shù)目多。本研究發(fā)現(xiàn)，經不同濃度的青蒿琥
7、酯處理的癌細胞軟瓊脂集落數(shù)明顯受到抑制。說明，青蒿琥酯可在一定程度上抑制結腸癌細胞的侵襲能力?！ ∧[瘤細胞本身的運動能力和侵襲力在腫瘤轉移過程中發(fā)揮重要作用，運動能力不僅是腫瘤細胞侵襲周圍組織，而且是侵入血管和穿出血管所必須。從理論上講，抑制腫瘤細胞運動將抑制腫瘤細胞的浸潤和轉移。一旦腫瘤細胞從原發(fā)腫瘤上脫落，它們將侵入宿主的細胞外基質,然后，穿透淋巴管和血管。為此，腫瘤細胞的侵襲必須穿透血管周圍的細胞外基質。本研究所用的基質膠(matrigel)含有Ⅳ型膠原、層粘蛋白、巢蛋白(entactin)、硫酸肝素蛋白多糖等成
8、分，與細胞外基質的成分非常相近。因此，能有效地在體外模擬腫瘤細胞的侵襲過程。在體外侵襲實驗中，我們觀察到S-1是一種跨膜蛋白，通過與其配體淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1，CD11a/CD18)和巨噬細胞相關復合體(Mac，CD11b/CD18)結合，介導細胞與細胞之間的相互活動；參與呈遞抗原信息、激活細胞免疫等過程［4，5］
