真核表達(dá)survivin基因?qū)η啪豠誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡作用的影響的論文

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1、真核表達(dá)survivin基因?qū)η啪谹誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡作用的影響的論文　　【摘要】目的探討survivin基因?qū)η啪豠(tsa)誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡作用的影響。方法(1)將本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建成功的survivin正義全長(zhǎng)真核表達(dá)質(zhì)粒(pcdna3.1survivin)，經(jīng)脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞a2780，以轉(zhuǎn)染pcdna3.1空載體的a2780細(xì)胞為對(duì)照。(2)rtpcr和rna和蛋白質(zhì)的表達(dá)。(3)mtt比色法和流式細(xì)胞儀(facs)分別檢測(cè)tsa對(duì)兩組細(xì)胞存活率和凋亡率的影響。(4)rna和蛋白質(zhì)表達(dá)明顯高于空載體組。(2)mtt比色法和facs檢測(cè)提示轉(zhuǎn)染pcdna3.

2、1survivin組細(xì)胞存活率明顯高于空載體組,細(xì)胞凋亡率明顯低于空載體組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。pcdna3.1survivin轉(zhuǎn)染后的a2780細(xì)胞對(duì)tsa的敏感性明顯降低。(3)axiaoli，xinghui，ading　　departmentofobstetricsandgynecology,tongjihospital,tongjimedicalcollege,huazhonguniversityofscienceandtechnology,ading，email：dma@tjh.tjmu.edu.abstract：objectivetoinvest

3、igatetheeffectofsurvivinexpressiononapoptosisofovariancancercellsinducedbytrichostatina(tsa).methods(1)a2780cellsrnaandproteinttassayandfloetry(facs).(4)expressionofsurvivinproteinentbyrnaandproteinintransfectedcellstransfectedttassayandfacs,respectively(p<0.05).thesensitivityofa2780cellstran

4、sfectede.conclusionapoptosisofovariancancercellsinducedbytsamayberelatedtotheexpressionofsurvivingene.　　keys;trichostatina;apoptosis　　卵巢癌在女性生殖器腫瘤中預(yù)后最差,極易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),這與卵巢癌化療耐藥密切相關(guān)。.cOmsurvivin基因是一種細(xì)胞凋亡抑制基因,位于17q25,是凋亡抑制蛋白家族(inhibitorofapoptosisproteins，iaps)中的一員[1]。它表達(dá)于胚胎和胎兒組織及絕大多數(shù)腫瘤組織，但在成人終末分化組織(胸腺、生殖

5、器除外)無(wú)表達(dá)[2]。它參與了惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和凋亡抵抗,使其成為值得關(guān)注的抗癌治療靶基因。曲古菌素a(trichostatina,tsa)是一種組蛋白去乙?；敢种苿?通過改變瘤細(xì)胞染色體上組蛋白去乙?；?影響多種基因的表達(dá)水平,從而誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡[3]。本實(shí)驗(yàn)將survivin的正義全長(zhǎng)真核表達(dá)質(zhì)粒(pcdna3.1survivin)轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞a2780，探討survivin基因?qū)η啪豠(tsa)誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡作用的影響。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1材料和試劑人卵巢癌細(xì)胞株a2780由武漢大學(xué)中國(guó)典型物種保藏中心提供;小牛血清為杭州四

6、季青生物工程材料有限公司產(chǎn)品;trizol試劑和培養(yǎng)基rpmi1640購(gòu)自美國(guó)gbicobrl公司;曲古菌素a購(gòu)自sigma公司;survivin兔抗人單克隆抗體購(gòu)自santacruz公司;四甲基偶氮唑鹽(mtt,5mg/ml,pbs配制)購(gòu)自amresco公司;脂質(zhì)體lipofectamim2000購(gòu)自invitrogentm公司;survivin正義全長(zhǎng)真核表達(dá)質(zhì)粒(pcdna3.1survivin)為本實(shí)驗(yàn)室保存[4];pcr引物由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成?！　?.1.2主要儀器酶標(biāo)儀為美國(guó)biorad2550型;流式細(xì)胞儀(facscanbectondickinson

7、)為美國(guó)公司產(chǎn)品;etra,german)為德國(guó)公司產(chǎn)品?！　?.2方法　　1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株a2780培養(yǎng)于含10%新鮮小牛血清的rpmi1640培養(yǎng)基中,置于37℃,5%co2,相對(duì)濕度90%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng)?！　?.2.2轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體lipofectamim2000包裹已構(gòu)建好的pcdna3.1survivin重組體和pcdna3.1空載體，將a2780細(xì)胞以1×106/ml接種6孔板，待其生長(zhǎng)至70%～80%