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《曲古抑菌素對小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系nci-h446的誘導(dǎo)分化及凋亡作用研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文曲古抑菌素對小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI--H446的誘導(dǎo)分化及凋亡作用研究姓名：劉侃申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：崔國興20120608江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要研究目的：觀察人小細(xì)胞肺癌(SCLC)NCI-H446細(xì)胞的干細(xì)胞特性(Stemness)，探討組蛋白去乙?；敢种苿┣乓志?TSA)對NCI—H446細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及凋亡的作用機(jī)制。為進(jìn)一步應(yīng)用組蛋白去乙?；敢种苿?HDACI)或其它細(xì)胞誘導(dǎo)分化劑治療小細(xì)胞肺癌提供了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究方法：(1)NCI．H446細(xì)胞經(jīng)RPMI1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)傳代后，用干細(xì)胞標(biāo)志蛋白巢蛋白(nestin)，
2、CDl33，波形蛋白(vimentin)和CD44的抗體對進(jìn)行免疫熒光染色，鑒定該細(xì)胞的干細(xì)胞特性。(2)NCI．H446細(xì)胞經(jīng)TSA誘導(dǎo)培養(yǎng)后，用神經(jīng)標(biāo)志蛋白神經(jīng)絲蛋白200(NF．200)，pIII．Tubulin，微管相關(guān)蛋白2(MAP2)和BM88及細(xì)胞增殖核抗原ki67的抗體進(jìn)行免疫熒光染色和免疫印跡測定(WesternBlotting法)，觀察NCI．H446細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的成熟程度和細(xì)胞增殖指數(shù)的變化。(3)用TUNEL染色法計(jì)算細(xì)胞的凋亡指數(shù)并用免疫印跡法測定細(xì)胞的凋亡相關(guān)蛋白Caspase3，Bax，Bcl．2表達(dá)水平的變化，觀察TSA對NCI．H446細(xì)胞的誘導(dǎo)凋
3、亡作用。研究結(jié)果：(1)在小細(xì)胞肺癌NCI．H446細(xì)胞株中，nestin，CDl33，vimentin和CD44高表達(dá)。曲古抑菌素對小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI．H446的誘導(dǎo)分化及凋亡作用研究(2)經(jīng)TSA誘導(dǎo)后的NCI．H446細(xì)胞株，NF一200，[3111．Tubulin，MAP2和BM88高表達(dá)。(3)經(jīng)TSA誘導(dǎo)后的NCI．H446細(xì)胞株，Caspase3明顯激活，Bax表達(dá)水平增高，Bcl．2表達(dá)水平降低，細(xì)胞的增殖指數(shù)明顯降低，凋亡指數(shù)明顯增高。結(jié)論：小細(xì)胞肺癌NCI．H446細(xì)胞株具有干細(xì)胞特性，TSA可誘導(dǎo)小細(xì)胞肺癌NCI—H446細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化成熟，并激活Caspa
4、se3導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。關(guān)鍵詞：人小細(xì)胞肺癌；曲古抑菌素；誘導(dǎo)分化；凋亡II江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文Objective：ABSTRACTToexplorethesternnessofsmallcelllungcancerNCI—H446celllineandtheeffectsofhistonedeacetylaseinhibitor(HDACi)，trichostaninA(TSA)，onthedifferentiationandapoptosisofthecancercells．Forfurtherapplicationofhistonedeacetylaseinhibitors(HDACI
5、)orothercelldifferentiationinducertreatmentofsmallcelllungcancerprovidesatheoreticalandexperimentalbasis．Methods：(1)NCI—H446cellswereculturedandproliferatedinRPMI1640mediumcontaining10％FBS，thenidentifiedtheexpressionsofstemcellmarkersonthemincludingnestin，CD133，CD44andvimentinwithimmunofluorescen
6、ce．(2)TheNCI．H446cellsweretreatedwithTSA，thenexpressionsofneuronmarkers，NF一200，[3III—Tubulin，MAP2andBM88，inthecellsweredetectedbyimmunofluorescenceandWesternblotting．TheproliferationcellnuclearantigenKi67immunofluorescence。stainingindex(proliferationindex)wasusedtoeveluatetheeffectofTSAonprolifer
7、ationofNCI-H446cells．(3)TheTUNEL(terminaldeoxynucleotidyltransferasedUTPnickendlabeling)methodwasappliedtocaculeteapoptoticindexoftheTSA．treatedcellsandexpressionsofapoptosisasociatedproteinsIII曲古抑菌素對小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI．H446的誘
