曲古菌素a和atra合用對plzfrarα轉(zhuǎn)基因陽性發(fā)病鼠骨髓細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用

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1、曲古菌素A和ATRA合用對PLZFRARα轉(zhuǎn)基因陽性發(fā)病鼠骨髓細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofalltransretinoicacid(ATRA)inbiioniceotertoexpressinmyeloidcellsofmice.Thegenotypeandphenotypemunofluorescence,morphologyofbonemarroarroiacellsorphologysastaining;cellcycledistributionandexpressionofce

2、llmembranesurfacedifferentiationrelatedantigens(suchasCD11b,CD117andGr1)inedbyfloetryassay.ExpressionofPLZFmunofluorescence.Functionaldifferentiation(NBT)reductionability.RESULTS:SomehCGPLZFRARαtransgenicmicedevelopedleukemiaresemblinghumanchronicmyeloidleukemia.Aftertreatedarr

3、oiacellspresentedmorphologicallysomefeaturesofdifferentiatedcells;thecellgroedependentmanner.TheproportionofcellsinSphageentedia,promyelocytic,acute　　【摘要】目的：研究組蛋白去乙酰化酶抑制劑曲古菌素A(trichostatinA,TSA)和ATRA對PLZFRARα轉(zhuǎn)基因發(fā)病鼠骨髓細(xì)胞的作用.方法：分子克隆技術(shù)構(gòu)建hCGPLZFRARα轉(zhuǎn)基因構(gòu)件.顯微注射建立僅在髓系細(xì)胞中表達(dá)PLZFRARα的轉(zhuǎn)基因

4、小鼠模型.DNAPCR，Southernblot，RTPCR，免疫熒光，血象，骨髓象，脾細(xì)胞形態(tài)，病理等檢測分析基因整合表達(dá)及發(fā)病情況.取PLZFRARα轉(zhuǎn)基因發(fā)病鼠骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)，經(jīng)TSA和ATRA作用一段時間后，LRARα融合基因，成為APL特征性的分子標(biāo)志.少數(shù)變異型APL患者攜帶t(11;17)(q23;q21)，表達(dá)PLZFRARα融合蛋白.PMLRARα和PLZFRARα兩種融合基因的產(chǎn)物均能阻斷維甲酸信號傳導(dǎo)通路，但二者對全反式維甲酸(alltransretinoicacid,ATRA)的反應(yīng)卻表現(xiàn)出明顯不同，即表達(dá)PMLR

5、ARα的APL患者對ATRA敏感，而表達(dá)PLZFRARα的患者對ATRA不敏感.ATRA和組蛋白去乙?；敢种苿╤istonedeacetylaseinhibitor,HDACi）曲古菌素A(trichostatinA,TSA)聯(lián)合治療可以誘導(dǎo)PLZFRARα陽性APL細(xì)胞發(fā)生分化［1］.我們利用建立的PLZFRARα融和基因在小鼠髓系細(xì)胞特異表達(dá)的hCGPLZFRARα轉(zhuǎn)基因鼠(transgenicmice,TM)模型，在生物水平研究了TSA聯(lián)合維甲酸對PLZFRARα陽性白血病細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用.　　1材料和方法　　1.1材料TM的建立參照

6、文獻(xiàn)［2］.本研究所已經(jīng)構(gòu)建了hCGPLZFRARα載體，將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，氨芐青霉素LB平板篩選出陽性克隆，獲得的質(zhì)粒經(jīng)酶切及測序驗(yàn)證后，用Qiagene純化柱大量提取質(zhì)粒，經(jīng)SalI,PvuI酶切完成質(zhì)粒線形化，純化得到轉(zhuǎn)基因構(gòu)件.將轉(zhuǎn)基因構(gòu)件顯微注射到受精卵雄原核，植入假孕母鼠，小鼠出生后2a)溶解于無水乙醇，配成1g/L儲存液,用時以培養(yǎng)液稀釋成10mg/L工作液.ATRA(Sigma)溶解于無水乙醇,配成10mmol/L儲存液,用時以培養(yǎng)液稀釋成100μmol/L工作液.　　1.2方法　　1.2.1基因整合檢測圖1轉(zhuǎn)基因鼠骨髓細(xì)胞PLZF表

7、達(dá)(IF×400)（略）　　2.2PLZFRARαTM發(fā)病表現(xiàn)PLZFRARα轉(zhuǎn)基因發(fā)病小鼠的癥狀類似于人類慢性粒細(xì)胞白血病(CML)，小鼠一般在出生后6~12mo發(fā)病.PLZFRARα發(fā)病小鼠與同窩陰性鼠相比，明顯消瘦、不活潑、弓背、翹毛、四肢蒼白，皮膚黏膜有時破潰出血，不經(jīng)治療自然病程一般為1~2mo.發(fā)病鼠外周血白細(xì)胞升高，粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比例顯著增加，一般均達(dá)到或超過1∶1（正常小鼠外周血粒淋比為0.13±0.04）；骨髓細(xì)胞粒系百分比增高，幼稚細(xì)胞比例高于正常值，原粒＋早幼粒細(xì)胞比例大于10%但小于20%，淋系、紅系細(xì)胞比例明顯降低；病理檢查

8、發(fā)現(xiàn)，發(fā)病鼠骨髓腔隙縮小，骨小梁間脂肪組織消失，造血