曲古菌素a和atra合用對plzfrarα轉(zhuǎn)基因陽性發(fā)病鼠骨髓細胞的誘導(dǎo)分化作用論文

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1、曲古菌素A和ATRA合用對PLZFRARα轉(zhuǎn)基因陽性發(fā)病鼠骨髓細胞的誘導(dǎo)分化作用論文陳思宇，董穎，陳麗娟，張龍，王龍，陳強，王振義【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofalltransretinoicacid(ATRA)inbiioniceotertoexpressinmyeloidcellsofmice.Thegenotypeandphenotypemunofluorescence,morphologyofbonemarroarroiacellsorphologysastaining;cellcycledistributionandexpressi

2、onofcellmembranesurfacedifferentiationrelatedantigens(suchasCD11b,CD117andGr1)inedbyfloetryassay.ExpressionofPLZFmunofluorescence.Functionaldifferentiation(NBT)reductionability.RESULTS:SomehCGPLZFRARαtransgenicmicedevelopedleukemiaresemblinghumanchronicmyeloidleukemia.Aftertreatedarroiacellspre

3、sentedmorphologicallysomefeaturesofdifferentiatedcells;thecellgroedependentmanner.TheproportionofcellsinSphageentedia,promyelocytic,acute【摘要】目的：研究組蛋白去乙酰化酶抑制劑曲古菌素A(trichostatinA,TSA)和ATRA對PLZFRARα轉(zhuǎn)基因發(fā)病鼠骨髓細胞的作用.方法：分子克隆技術(shù)構(gòu)建hCGPLZFRARα轉(zhuǎn)基因構(gòu)件.顯微注射建立僅在髓系細胞中表達PLZFRARα的轉(zhuǎn)基因小鼠模型.DNAPCR，Southernblot.free

4、lsa染色觀察細胞形態(tài)，流式細胞儀檢測細胞周期、細胞表面分化抗原CD11b和CD117等的表達，熒光免疫細胞化學(xué)染色檢測融合蛋白表達，硝基藍四氮唑(NBT)還原試驗觀察細胞功能分化情況.結(jié)果：TSA(30μg/L)聯(lián)合ATRA(1μmol/L)使發(fā)病鼠骨髓細胞核質(zhì)比縮小，幼稚細胞比例減少，細胞生長增殖受抑，S期細胞減少，PLZF蛋白的表達呈局部聚集的趨勢，但NBF還原試驗變化尚不明顯.結(jié)論：組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA聯(lián)合ATRA可使PLZFRARα轉(zhuǎn)基因發(fā)病鼠骨髓細胞發(fā)生部分分化.【關(guān)鍵詞】PLZF；維甲酸；轉(zhuǎn)基因；組蛋白去乙?；福环只?；白血病,早幼粒,急性0引言在誘導(dǎo)腫瘤細胞分化方面

5、，急性早幼粒細胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)為人們提供了一個理想的研究模型［1］.約95%APL患者的白血病細胞中攜帶有非隨機染色體易位t(15;17)(q22;q21)，形成PMLRARα融合基因，成為APL特征性的分子標志.少數(shù)變異型APL患者攜帶t(11;17)(q23;q21)，表達PLZFRARα融合蛋白.PMLRARα和PLZFRARα兩種融合基因的產(chǎn)物均能阻斷維甲酸信號傳導(dǎo)通路，但二者對全反式維甲酸(alltransretinoicacid,ATRA)的反應(yīng)卻表現(xiàn)出明顯不同，即表達PMLRARα的APL患者對ATRA敏感，而

6、表達PLZFRARα的患者對ATRA不敏感.ATRA和組蛋白去乙?；敢种苿╤istonedeacetylaseinhibitor,HDACi）曲古菌素A(trichostatinA,TSA)聯(lián)合治療可以誘導(dǎo)PLZFRARα陽性APL細胞發(fā)生分化［1］.我們利用建立的PLZFRARα融和基因在小鼠髓系細胞特異表達的hCGPLZFRARα轉(zhuǎn)基因鼠(transgenicmice,TM)模型，在生物水平研究了TSA聯(lián)合維甲酸對PLZFRARα陽性白血病細胞的誘導(dǎo)分化作用.1材料和方法1.1材料TM的建立參照文獻［2］.本研究所已經(jīng)構(gòu)建了hCGPLZFRARα載體，將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸

7、桿菌，氨芐青霉素LB平板篩選出陽性克隆，獲得的質(zhì)粒經(jīng)酶切及測序驗證后，用Qiagene純化柱大量提取質(zhì)粒，經(jīng)SalI,PvuI酶切完成質(zhì)粒線形化，純化得到轉(zhuǎn)基因構(gòu)件.將轉(zhuǎn)基因構(gòu)件顯微注射到受精卵雄原核，植入假孕母鼠，小鼠出生后2a)溶解于無水乙醇，配成1g/L儲存液,用時以培養(yǎng)液稀釋成10mg/L工作液.ATRA(Sigma)溶解于無水乙醇,配成10mmol/L儲存液,用時以培養(yǎng)液稀釋成100μmol/L工作