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《045紅細(xì)胞自身溶血試驗》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、四川省旺蒼縣人民醫(yī)院檢驗科WangCangXiansichuanprovincepeople'shospitalclinicallaboratory紅細(xì)胞自身溶血試驗Redbloodcellitselfthehemolysistest文件編號Filename：WCXRMYY-LAB-LJ-ZY--045版本Edition：2.0版，頁碼Page：第1頁共1頁發(fā)布日期DateofIssue：2010年1月1日執(zhí)行日期DateofPerform：2010年1月1日1原理本試驗是測定患者血液在37℃孵育48小時后，自發(fā)產(chǎn)生的溶血程度。遺傳性非球形細(xì)胞溶血性貧血患者由于細(xì)胞內(nèi)酶
2、缺陷,糖酵解發(fā)生障礙,能量供應(yīng)不足,不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉的平衡,使患者紅細(xì)胞在自身血清中經(jīng)溫育后逐漸發(fā)生溶血.若屬I型(包括磷酸戊糖旁路中多種酶缺陷),其自身溶血能被葡萄糖和ATP糾正;若屬II型(缺乏丙酮酸激酶或ATP),則自身溶血不能被葡萄糖糾正,只能被ATP糾正.因此,本試驗有助于遺傳性非球形細(xì)胞溶血性貧血的鑒別診斷.2試劑2.1100g/L葡萄糖(無菌);2.2等滲鹽水(無菌);2.3HiCN稀釋液;2.40.4mol/LATP生理鹽水無菌液:稱取ATP2.5g溶于10ml無菌生理鹽中,用30g/LTris溶液或0.1mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)至PH6.8，加熱消
3、毒后備用。3操作3.1取4支小試管(每管加1g/L肝素0.02ml,8磅15min高壓滅菌,烘干),編號測定管1.2.3.4號.3.2取靜脈血4ml,以無菌手續(xù)按下表加入各試管內(nèi),混合抗凝,按表操作.管號123全溶血對照肝素抗凝血(ml)1.01.01.0-100g/L葡萄糖(ml)0.05---0.4mol/LATP(ml)-0.05--9g/LnaCl(ml)--0.05-37℃孵育48h后作壓積測定4℃冷藏孵育后血漿(ml)0.20.20.20.1(全血)HiCN稀釋液(ml)4.84.84.89.93.3四號管全血,抽取后即放4℃冰箱內(nèi)保存,用來制備”全溶血對照
4、管”.3.4以冷藏血離心后的血漿0.2ml加HiCN稀釋液4.8ml為空白對照管.分光光度計波長540nm處,用空白對照管調(diào)零,讀取上述各管吸光度值.2四川省旺蒼縣人民醫(yī)院檢驗科WangCangXiansichuanprovincepeople'shospitalclinicallaboratory紅細(xì)胞自身溶血試驗Redbloodcellitselfthehemolysistest文件編號Filename：WCXRMYY-LAB-LJ-ZY--045版本Edition：2.0版，頁碼Page：第1頁共1頁發(fā)布日期DateofIssue：2010年1月1日執(zhí)行日期Dat
5、eofPerform：2010年1月1日3.5計算各測定管的溶血率(相當(dāng)于全溶血對照管100%的比值).測定管的溶血率(%)=測定管A×(1-紅細(xì)胞比積)/全溶血對照管A×4×100%4附注應(yīng)嚴(yán)守?zé)o菌操作規(guī)程.5臨床意義5.1正常人血液在無菌條件下孵育48h后,溶血率很低,一般<4.0%,加葡萄糖或ATP后,溶血率更低(一般<0.6%).5.2遺傳性球形細(xì)胞增多癥自身溶血加快,能被葡萄糖糾正.遺傳性非球形細(xì)胞溶血性貧血自身溶血增加,其中I型由于6磷酸葡萄糖脫氫酶活性減低,能被葡萄糖和ATP糾正;II型因缺乏丙酮酸激酶,溶血不能被葡萄糖糾正,但能被ATP糾正.PNH、自免
6、溶貧和藥物性溶貧等均不能被葡萄糖糾正。2
