紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)

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1、紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)血球凝集(HA)試驗(yàn):有些病毒具有凝集某種(些)動(dòng)物紅細(xì)胞的能力，稱(chēng)為病毒的血凝，利用這種特性設(shè)計(jì)的試驗(yàn)稱(chēng)血球凝集(HA)試驗(yàn)血球凝集抑制(HI)試驗(yàn):病毒的凝集紅細(xì)胞的能力可被相應(yīng)的特異性抗體所抑制，即血球凝集抑制(HI)試驗(yàn)阿氏液（Alsever）：即紅細(xì)胞保養(yǎng)液指紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象。由病毒、細(xì)胞凝集素和抗體而引起的紅細(xì)胞凝集。（1）由病毒而引起的凝集：G．H．Hirst（1941）發(fā)現(xiàn)流感病毒能使雞的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，其后又發(fā)現(xiàn)其它各種病毒也能引起同樣的紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。即紅細(xì)胞表面存在著對(duì)各種

2、病毒的受體，病毒與受體結(jié)合，以紅細(xì)胞為橋梁的結(jié)果而引起凝集。利用此反應(yīng)可以進(jìn)行病毒的定性和定量。另外，如果存在抗病毒的抗體時(shí)，則由病毒引起的凝集作用將被抑制，所以可用于抗病毒抗體的檢出。（2）由抗體引起的凝集：（a）如果存在對(duì)紅細(xì)胞表面決定基的抗體，則紅細(xì)胞亦將凝集?？捎糜跍y(cè)定對(duì)抗紅細(xì)胞的抗體的效價(jià)或鑒定人的血型。（b）在紅細(xì)胞表面，如果人為地使之吸附或結(jié)合特定的抗原物質(zhì)，則與該抗原相對(duì)應(yīng)的抗體將引起紅細(xì)胞凝集（被動(dòng)凝集反應(yīng)或間接凝集反應(yīng)，psssivehe-magglntination）?！　⊙把种?/p>

3、試驗(yàn)　　有些病毒具有凝集某種(些)動(dòng)物紅細(xì)胞的能力，稱(chēng)為病毒的血凝，利用這種特性設(shè)計(jì)的試驗(yàn)稱(chēng)血球凝集(HA)試驗(yàn)，以此來(lái)推測(cè)被檢材料中有無(wú)病毒存在，是非特異性的，但病毒的凝集紅細(xì)胞的能力可被相應(yīng)的特異性抗體所抑制，即血球凝集抑制(HI)試驗(yàn)，具有特異性。通過(guò)HA-HI試驗(yàn)，可用已知血清來(lái)鑒定未知病毒，也可用已知病毒來(lái)檢查被檢血清中的相應(yīng)抗體和滴定抗體的含量。?　　[目的要求]　　掌握病毒HA和HI試驗(yàn)的原理和基本操作方法，了解其實(shí)用價(jià)值?！　材料與試劑]　　1.96孔“U”形或“V”形微量反應(yīng)板，50uL定

4、量移液器，滴頭，微型振蕩器?！　?.生理鹽水，0.5%雞紅細(xì)胞懸液，新城疫病毒液（尿囊液或凍干疫苗液），新城疫陽(yáng)性血清，被檢雞血清?！　實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作方法]　?。ㄒ唬┭蚰?HA)試驗(yàn)?　　1.在96孔微量反應(yīng)板上進(jìn)行，自左至右各孔加50uL生理鹽水。　　2.于左側(cè)第1孔加50uL病毒液（尿囊液或凍干疫苗液），混合均勻后，吸50uL至第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，吸棄50uL；第12孔為紅細(xì)胞對(duì)照。　　3.自右至左依次向各孔加入0.5%雞紅細(xì)胞懸液50uL，在振蕩器上振蕩，室溫下靜置后觀察結(jié)果（表4-1

5、）?！　”?-1?病毒血凝試驗(yàn)的操作方法（單位：uL）　　孔號(hào)123456789101112病毒稀釋度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:2048對(duì)照生理鹽水505050505050505050505050病毒液50505050505050505050500.5%紅細(xì)胞505050505050505050505050棄50結(jié)果觀察+++++++++++++++++++++++++++++--4.結(jié)果判定：從靜置后10min開(kāi)始觀察結(jié)果，待對(duì)照孔紅細(xì)胞已沉淀即

6、可進(jìn)行結(jié)果觀察。紅細(xì)胞全部凝集，沉于孔底，平鋪呈網(wǎng)狀，即為100%凝集（++++），不凝集者（-）紅細(xì)胞沉于孔底呈點(diǎn)狀?！　∫?00%凝集的病毒最大稀釋度為該病毒血凝價(jià)，即為一個(gè)凝集單位。從表4-1看出，該新城疫病毒液的血凝價(jià)為1:128，則l:128為1個(gè)血凝單位，1:64、l:32分別為2、4個(gè)血凝單位，或?qū)?28/4=32，即1:32稀釋的病毒液為4個(gè)血凝單位。　　(二)?血球凝集抑制(HI)試驗(yàn)　　1.根據(jù)HA試驗(yàn)結(jié)果，確定病毒的血凝價(jià)，配制出4個(gè)血凝單位的病毒液?！　?.在96孔微量反應(yīng)板上進(jìn)行，用

7、固定病毒稀釋血清的方法，自第1孔至第11孔各加50uL生理鹽水?！　?.第1孔加被檢雞血清50uL，吹吸混合均勻，吸50uL至第2孔，依此倍比稀釋至第10孔，吸棄50uL，稀釋度分別為：1:2、1:4、1:8……；第12孔加新城疫陽(yáng)性血清50uL，作為血清對(duì)照?！　?.自第1孔至12孔各加50uL4個(gè)血凝單位的新城疫病毒液，其中第11孔為4單位新城疫病毒液對(duì)照，振蕩混合均勻，置室溫中作用10min?！　?.自第l孔至12孔各加0.5%雞紅細(xì)胞懸液50uL，振蕩混合均勻，室溫下靜置后觀察結(jié)果（表4-2）?！　”?/p>

8、4-2?病毒血凝抑制試驗(yàn)的操作方法（單位：mL）　　孔號(hào)123456789101112血清稀釋度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:1024病毒對(duì)照血清對(duì)照生理鹽水5050505050505050505050被檢雞血清50505050505050505050504單位病毒505050505050505050505050室溫中靜置10min0.5%紅細(xì)胞5050