槲皮素對人類乳腺癌細(xì)胞增殖的影響論文

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1、槲皮素對人類乳腺癌細(xì)胞增殖的影響論文.freelol/L)能顯著促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖,而抑制ER陰性MDA-MB231細(xì)胞,并將MCF-7細(xì)胞周期由G1期向S期推進(jìn),促進(jìn)DNA合成,提高細(xì)胞分裂增殖指數(shù),且Que促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖作用被ER拮抗劑所拮抗。結(jié)論Que具有雌激素活性,此作用是通過ER介導(dǎo)的?！娟P(guān)鍵詞】植物雌激素槲皮素雌激素受體細(xì)胞增殖MCF-7MDA-MB231Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofquercetinontheproliferationofmammaryc

2、ancercellinvitro.MethodsEffectsofquercetinonthecellproliferationeasurement.Andtoevaluatetheestrogen-likeeffectofquercetinanditsrelationinedbyfloetry.ResultQuercetin(10～50μmol/L)stimulatedproliferationofER-positiveMCF-7cellparedpulsedfromG1toS,DNAsynthesizingICI182,780.Con

3、clusionQuercetinhastheestrogen-likeactivitiesthroughtheestrogenresponsepatha公司產(chǎn)品。DMEM(高糖)、無酚紅DMEM、活性炭-葡聚糖苷處理的胎牛血清(CDT-FBS)為Hyclone公司產(chǎn)品；胰蛋白酶為Gibco公司產(chǎn)品。1.3主要儀器CO2培養(yǎng)箱(Binder制造)；酶聯(lián)免疫檢測儀(EQUENLX-800)；倒置顯微鏡(Olympus)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1細(xì)胞培養(yǎng)MCF-7、MDA-MB231細(xì)胞采用開放式單層貼壁培養(yǎng),培養(yǎng)液為DMEM(含10%胎牛血清),培養(yǎng)

4、條件為37℃、5%CO2。試驗(yàn)開始前4d將細(xì)胞用PBS洗滌后改為在無酚紅DMEM(含5%CDT-FBS)中培養(yǎng)以耗盡細(xì)胞內(nèi)儲存的雌激素。2.2分組將各Que試物用DMSO溶解后,以培養(yǎng)液稀釋成所需濃度。溶劑對照組(DMSO組)：體積含量比為0.1%；雌激素對照組(E2組)：0.001μmol/L；Que組：1、10、20、30、40、50μmol/L。2.3MTT細(xì)胞增殖試驗(yàn)MCF-7、MDA-MB231細(xì)胞經(jīng)無酚紅DMEM(含5%CDT-FBS)培養(yǎng)4d后,選取對數(shù)生長期細(xì)胞,用0.25%胰蛋白酶消化,0.01μmol/LPBS(pH7

5、.4)洗2次,加入無血清DMEM,以每孔2×103個的濃度接種于96孔板內(nèi),每孔培養(yǎng)液總體積為200μL。培養(yǎng)24h待細(xì)胞貼壁后,換為含陽性藥物(E2)及4種受試物的DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),每種受試物設(shè)4個復(fù)孔。分別于24、48、72h時,每孔加入5mg/mLMTT20μL,繼續(xù)孵育4h,小心吸去培養(yǎng)液,每孔加入DMSO200μL,震蕩5～10min,使結(jié)晶物完全溶解。以DMSO調(diào)零,用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm下測定各孔光吸收值,計算平均A值和增殖率(PR)。PR＝(實(shí)驗(yàn)組A值/溶劑對照組A值)×100%2.4雌激素受體完全拮抗實(shí)驗(yàn)為驗(yàn)

6、證受試物促M(fèi)CF-7細(xì)胞的增殖是否通過ER發(fā)生作用,取經(jīng)無酚紅DMEM(含5%CDT-FBS)培養(yǎng)4d后的MCF-7細(xì)胞,以每孔2×103個接種于96孔板。培養(yǎng)24h待細(xì)胞貼壁后,換為含陽性藥物(E2)及不同濃度藥物的無酚紅DMEM培養(yǎng)液,各孔同時分別加入終濃度為10-8mol/L的雌激素受體完全拮抗劑ICI182、7804,每種受試物設(shè)4個復(fù)孔。于24h加入MTT,孵育4h后吸去培養(yǎng)液,以DMSO溶解,在570nm下測定各孔光吸收值,計算平均A值和增殖率。2.5細(xì)胞周期測定取經(jīng)無酚紅DMEM(含5%CDT-FBS)培養(yǎng)4d的MCF-7細(xì)

7、胞,以5×105個/瓶的密度接種于96孔板中,以無血清DMEM接種24h待細(xì)胞貼壁后,換為含陽性藥物及不同濃度藥物的DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),每種受試物設(shè)3個復(fù)孔。48h后終止培養(yǎng),收獲細(xì)胞用70%冷乙醇4℃固定過夜,RNase處理,PI染色,2h內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布,并計算細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)。PI＝(S＋G2M)/(G0/G1＋S＋G2M)×100%2.6統(tǒng)計學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示,采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析(one-echanismofactioninvitroJ.CancerLett,1998,130：1

8、43.3趙丕文,王大偉,王玲巧,等.用小鼠子宮增重法篩選淫羊藿等十味中藥雌激素樣作用的實(shí)驗(yàn)研究J.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2006,29(10)：686.4SibongaJD,DobnigH,Ha