槲皮素抑制胃癌bgc823細胞增殖的研究論文

《槲皮素抑制胃癌bgc823細胞增殖的研究論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、槲皮素抑制胃癌BGC823細胞增殖的研究論文徐永中，范鈺，姚廣濤，李儀奎【摘要】目的探討槲皮素治療胃癌細胞的作用機制。方法采用不同濃度的槲皮素處理胃癌BGC823細胞后，采用四唑鹽比色試驗檢測癌細胞生長，分別以瓊脂糖凝膠電泳和TUNEL檢測癌細胞凋亡，分別采用熒光實時定量PCR和ethodsGastriccancerBGC823cellsinedbyMTTassay,andtheapoptosisinedbyagarosegelelectrophoresisandTUNELassays,respectively.Therealtime-PCRandedtostudytheexp

2、ressionofsurvivin.ResultsQuercetinhadaremarkableinhibitionongastriccancercelllineBGC823.FromDNAladderandTUNELassay,apoptosisanner.Inaddition,quercetinresultedindoRNAandproteinfromrealtime-PCRandangastriccancerBGC823cellthroughinducingapoptosisanddoa公司，用DMSO(二甲基亞砜)配成儲液，-20℃冰箱保存。實驗時用1640培養(yǎng)基稀釋，

3、DMSO的最終濃度小于0.9%。人胃癌細胞株BGC823購自中科院上海細胞所細胞庫。TriIzol試劑購自Invitrogen公司。BCA蛋白分析試劑盒購自PIERCE公司。細胞凋亡原位檢測試劑盒，購自Roche公司。1.2細胞培養(yǎng)及處理胃癌BGC823細胞在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的RPMI-1640（美國GIBCOBRL）。待細胞至指數(shù)生長期，收集細胞，調(diào)整細胞濃度為1×104/ml，按每孔0.1ml接種到96孔培養(yǎng)板中，24h后，分別加入不同濃度的槲皮素，設(shè)3個復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT1

4、00μl，作用4h后，加入DMSO100μl，孵育30min，在酶標(biāo)儀570nm處測吸光度A值，計算抑制率。1.3細胞凋亡檢測1.3.1DNA末端原位標(biāo)記染色法（TUNEL）接種胃癌細胞于24孔板，以不同濃度的槲皮素處理，48h后終止細胞培養(yǎng)，4%多聚甲醛固定30min。其余步驟按Roche公司藥盒說明書進行。光鏡下計算凋亡指數(shù)。凋亡指數(shù)（ApoptosisIndex，AI）計算方法：數(shù)5個高倍鏡＞1000個細胞，分別計數(shù)總細胞數(shù)量和凋亡細胞數(shù)量。AI（%）＝凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)×100％。1.3.2瓊脂糖凝膠電泳按照文獻［3］的方法進行瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下檢測并拍照。1.

5、4Survivin基因表達檢測1.4.1mRNA水平應(yīng)用熒光實時定量PCR方法檢測。以Trizol抽提細胞總RNA，取總RNA1μg，以O(shè)ligodT（15mer）為引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第1鏈，以此cDNA鏈2μl為模板進行PCR擴增，步驟參照說明書。引物序列為：上游：5'-ATTTGAATCGCGGGACCC-3'；下游：5'-GAGAAAGGGCTGCCAGGC-3'。FAM探針：5'-CATGGGTGCCCCGACGTTGC-3'-TAMRA。以GAPDH為內(nèi)參。定量PCR步驟和PCR反應(yīng)條件參照文獻［4］進行。1.4.2蛋白水平采用TT法檢測槲皮素對胃癌細胞增殖的抑制

6、作用，發(fā)現(xiàn)槲皮素可明顯抑制胃癌SGC823細胞的惡性增殖，且在5～40μmol/L濃度范圍內(nèi)，呈明顯的濃度依賴性。其IC50約為45.91μmol/L。見圖1。2.2槲皮素誘導(dǎo)胃癌細胞BGC823凋亡以不同濃度的槲皮素處理胃癌細胞后，收集細胞，分別采用瓊脂糖凝膠電泳和TUNEL檢測（見圖2～3）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，處理組細胞凋亡指數(shù)明顯增高，DNA凝膠電泳顯現(xiàn)明顯的梯狀圖譜，且均呈濃度依賴性（P＜0.05）。2.3槲皮素對胃癌BGC823細胞survivin基因表達的影響以槲皮素處理細胞后，于不同時間收集細胞，分別采用實時定量PCR和RNA和蛋白水平明顯降低（P＜0.05）。結(jié)果見圖4

7、～5。3討論自1971年美國NCI組織首次發(fā)現(xiàn)槲皮素對Ｐ388白血病的抑制作用后，許多研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可抑制白血病、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、膀胱癌等多種癌細胞的增殖，誘導(dǎo)腫瘤細胞發(fā)生凋亡［1］。但目前尚無槲皮素處理胃癌細胞的報道。本研究采用槲皮素處理胃癌BGC823細胞，觀察了其對增殖的影響，并從端粒酶和細胞凋亡方面初步探索了其可能的機制。凋亡在調(diào)控細胞增殖、腫瘤的形成和發(fā)展中起關(guān)鍵作用［5］。本研究采用不同濃度的槲皮素處理胃癌細胞，于不同時間收集細胞，分別采用TUNEL和瓊脂糖凝膠電泳