膀胱癌中乙酰肝素酶的表達和臨床意義.doc

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1、膀胱癌中乙酰肝素酶的表達和臨床意義作者：賴潭，涂響安，呂自力，鄭克立　丘少鵬，鄧春華【摘要】目的探討國人膀胱癌乙酰肝素酶的表達水平及其與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復發(fā)的關(guān)系。方法應用免疫組化EnVision二步法研究58例膀胱癌患者中乙酰肝素酶蛋白的表達水平，10例正常膀胱黏膜為對照組。結(jié)果乙酰肝素酶在膀胱癌中陽性表達22例(37.9%)，其表達率與腫瘤的病理分級、臨床分期、復發(fā)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論乙酰肝素酶蛋白的異常表達可作為膀胱癌患者發(fā)生和發(fā)展的預后參數(shù)。【關(guān)鍵詞】膀胱腫瘤；乙酰肝素酶；免疫組化Expressionandclinicalsignificanceof

2、heparanaseinChinesewithbladdercarcinomaABSTRACT:ObjectiveTostudytheexpressionofheparanaseinChinesewithbladdercarcinomaandtherelationshipwithitsdevelopment,progression,metastasisandrecrudesence.MethodsImmunohistochemicaltechniquewasusedtodetecttheexpressionofheparanasein58casesofbladdercarcinoma.Res

3、ultsThepositiveproteinexpressionofheparanasewas37.9%(22/58).Theheperanaseproteinexpressionwascorrelatedwiththepathologicaltype,clinicalstage,recrudesenceandlymphnodemetastasis(P<0.05).ConclusionHeparanaseproteinoverexpressionmightserveasamarkerfortheprognosisofChinesebladdercarcinoma.KEYWORDS:bla

4、dderneoplasm;heparanase;immunohistochemicaltechnique細胞外基質(zhì)和基底膜是腫瘤細胞侵襲及轉(zhuǎn)移的屏障。糖氨聚糖是此屏障的主要成分之一，它的主要成分為硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparansulfateproteoglycan,HSPG)。乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)正是一種裂解糖氨聚糖中HS鏈的內(nèi)切糖苷酶,在細胞侵襲中起著極其重要的作用。最近,隨著Hpa基因得以克隆，相繼獲得一些有意義的實驗結(jié)果，Hpa在侵襲性細胞穿越血管壁,實現(xiàn)浸潤、擴散、轉(zhuǎn)移過程中的關(guān)鍵作用受到廣泛關(guān)注[1]。我們應用免疫組化EnVision二步法研究58例膀胱癌

5、患者和10例正常膀胱黏膜乙酰肝素酶蛋白的表達水平，探討膀胱癌中乙酰肝素酶的表達水平及其與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復發(fā)的關(guān)系。1資料與方法1.1臨床資料3收集中山大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科1998-2003年手術(shù)切除膀胱癌標本58例,男性47例，女性11例。年齡21-81歲，平均58.6歲。WHO病理分級：G117例，G225例，G316例。UICC臨床分期：T132例，T214例，T312例。復發(fā)20例，未復發(fā)38例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性15例，陰性43例。10例正常膀胱組織作為對照。1.2方法1.2.1試劑鼠抗人乙?；嗡孛竼慰寺】贵w購自武漢博士德公司，EnVision二抗為DAKO公司產(chǎn)品，二氨基

6、聯(lián)苯胺(DAB)試劑盒購自福州邁新公司。全部標本均用10%(體積分數(shù))中性甲醛固定，常規(guī)組織脫水、石蠟包埋，4μm厚組織切片，并進行HE染色，用于組織定位。1.2.2免疫組織化學染色采用免疫組織化學染色EnVision二步法，實驗步驟按試劑盒說明進行。乙酰肝素酶一抗工作濃度為1∶50，采用微波煮沸15min修復抗原，抗原修復液為0.01mol/L檸檬酸緩沖液(pH6.0)。一抗4℃孵育過夜，PBS洗3次，EnVision二抗室溫孵育40min，PBS洗3次后DAB顯色3-5min，自來水終止顯色，充分水洗后蘇木精復染，常規(guī)脫水、透明、中性樹膠封片。以已知陽性切片做陽性對照，陰性對照以PBS替代

7、第一抗體。1.2.3結(jié)果判斷乙酰肝素酶陽性信號為細胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，陽性細胞數(shù)<10%為(-)；陽性細胞數(shù)10%-50%為(+)；陽性細胞數(shù)>50%為()。1.2.4統(tǒng)計學分析采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件，χ2檢驗，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果乙酰肝素酶蛋白在膀胱癌患者陽性表達率為37.9%(22/58)，其陽性顆粒定位于癌細胞漿內(nèi)(圖1)。G1、G2和G3期腫