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《人臍帶間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞誘導分化的實驗研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、山西醫(yī)科大學碩士學位論文人臍帶間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞誘導分化的實驗研究姓名：祝佳佳申請學位級別：碩士專業(yè)：骨科學指導教師：衛(wèi)小春20070504一出疆醫(yī)赴盤芏曼±蘭壁曼塞人臍帶聞充質(zhì)千細胞向軟骨細胞誘導分化的實驗研究摘要目的探討人臍帶問充質(zhì)干細胞在單層培養(yǎng)中向軟骨細胞定向分化的條件，為軟骨組織工程學提供新的種子細胞．方法采用細胞產(chǎn)品國家工程研究中心原代人臍帶問充質(zhì)干細胞，在含10％胎牛血清的低糖DMEM／F-12培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴增，流式細胞儀分析臍帶問充質(zhì)干細胞的表面標志。將培養(yǎng)第3代細胞分為4組：A組為對照組，
2、B組為無血清誘導培養(yǎng)基組(含lOng／ml的TGF-口l、丙酮酸鈉lmM、地塞米松10-7M、牛胰島素6．25l,g／mt、轉(zhuǎn)鐵蛋白6．25ag／ml的高糖DMEM培養(yǎng)液)；c組為含5％胎牛血清的誘導培養(yǎng)基組；D組為含10％胎牛血清的誘導培養(yǎng)基組。倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀況，甲苯胺藍染色檢測蛋白多糖的分泌，免疫組化檢測Ⅱ型膠原分泌，原位雜交檢測Ⅱ型膠原mRNA表達，MTT法檢測細胞的增殖情況．結(jié)果臍帶問充質(zhì)干細胞經(jīng)體外培養(yǎng)擴增，貼壁后的細胞形態(tài)均一，呈梭形，并一致表達CD44，而CD34、CD38呈陰性．B、
3、c組細胞在誘導培養(yǎng)9天后甲苯胺藍染色陽性，Ⅱ型膠原免疫組化均為陽性，原位雜交可檢測到Ⅱ型膠原mRNA的表達，而A、D兩組分別為陰性和弱陽性．D組細胞增殖最強，而B組細胞最弱，四組細胞經(jīng)MT'F法檢測后吸光度值(opticaldensityOD)大小順序為D>C>A>B。結(jié)論人臍帶間充質(zhì)干細胞在體外培養(yǎng)擴增后，生長穩(wěn)定，表型均一；10ng／ml的TGF-15l可誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞方向分化，但在無血清培養(yǎng)基中無法有效的促進細胞的增殖；低濃度的胎牛血清(5％)和10rig／ram的TGF-pl聯(lián)合作用既
4、可促進入臍帶問充質(zhì)干細胞的增殖，又可誘導其向軟骨細胞方向分化，而高濃度胎牛血清僅對細胞的增殖有促進作用．．關(guān)鍵詞臍帶，問充質(zhì)干細胞，轉(zhuǎn)化生長因子p1，分化，軟骨細胞ExperimentalStudyofInVitroChondrogenicDifferentiationofHumanumbilicalcordMesenchymaiStemCellsAbstactPurposeThepurposeofthisstudyistoestablishamethodofculturinghumanumbilicalcor
5、dmeseaehymalstemceII(hUCMSC)andinvestigatethefeasibilityofinvitrochondrogenicdifferentiationofhUCMSCinmonolayeralIntreaspotentialseedingcellsincartilagetissueengineering．MethodsTheo堍inalhUCMSCderivedfromTheNationResearchCenterofCellProduction,hUCMSCculturedi
6、ntheDulbccco'sModifiedEagle'sMedium／F-12NutrientMixture(DM：EM，F(xiàn)．12)withlowglucosecontaining10％fetalbovineserum,flowcytometricanalysisWasperformedtoexaminetheexpressionofcellsurfacemoleculesOUhUCMSC．HUCMSC丘omthethirdpassageweregrownincompletemedium(A)，inducti
7、veserum-freemedium(B)，inductivemediumwith5％fetalbovinesemm(q，inductivemediumwith10％fetalbovinescram(D)respectively．ThegrowthoftheculturedhUCMSCWasobserved．Tbesyntheticproteoglycamweredetectedbytoluidinebluestaining．Immunohistochemistryandinsituhybridizationw
8、ereappliedtodetecttheexpressionofcollagentypeII．11虻proliferationofthecellswasexaminedbyMTTtesLResultsAfterproliferationinvitro．Tbeadherentcellsshowedaspindle—likeappearanceandexpressedpositiveCD
