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1、河南大學(xué)碩士學(xué)位論文茯苓多糖的發(fā)酵、提取及其理化、結(jié)構(gòu)性質(zhì)鑒定的研究姓名:林標(biāo)聲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師:楊生玉20080501河南大學(xué)2008屆碩士研究生學(xué)位論文中文摘要茯苓是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材,茯苓多糖是茯苓的最有效的成分之一。實(shí)驗(yàn)證明茯苓多糖能提高人體免疫機(jī)能,具有防治腫瘤、促進(jìn)細(xì)胞分裂、抗炎等生物學(xué)活性,逐步被應(yīng)用于臨床,市場(chǎng)需求日益增大,具有較高的開(kāi)發(fā)價(jià)值及良好的應(yīng)用前景。目前,茯苓多糖的生產(chǎn)來(lái)源主要為野生或人工種植的子實(shí)體,周期長(zhǎng)、成本高、產(chǎn)量小,限制了人們的使用;并
2、且,從茯苓子實(shí)體中提取茯苓多糖的效率較低。本論文采用液體發(fā)酵法培養(yǎng)茯苓菌絲體,從中提取茯苓多糖,具有周期短、成本低、產(chǎn)量大的優(yōu)勢(shì),還可以獲得標(biāo)準(zhǔn)一致的多糖產(chǎn)品滿足工業(yè)化的要求。本論文以茯苓菌株HD06.10為研究材料,通過(guò)茯苓菌絲染色觀察、菌絲核相觀察、單孢菌株的配對(duì)實(shí)驗(yàn),對(duì)茯苓的基本生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究。通過(guò)茯苓的搖瓶液體培養(yǎng),確定茯苓液體發(fā)酵的最適發(fā)酵培養(yǎng)基和最適培養(yǎng)條件,為大規(guī)模茯苓多糖的生產(chǎn)提供了參考性的依據(jù),即:發(fā)酵溫度26℃、搖瓶轉(zhuǎn)速150rpm、種子液接種量為6%、葡萄糖4%、蛋白
3、胨O.75%、硝酸鉀0.75%、MgS04·7H200.05%、KH2P040.1%、pH5.5、裝液量為80nlL/250rnL。比較發(fā)酵茯苓菌絲體和商品藥材茯苓的多糖提取,結(jié)果表明,雖然從發(fā)酵茯苓菌絲體提取的總多糖含量低于商品藥材茯苓提取的總多糖,但發(fā)酵菌絲體中含有更高比例的具有較強(qiáng)生理活性的水溶性多糖。對(duì)發(fā)酵液中提取的茯苓多糖進(jìn)行羧甲基化的結(jié)構(gòu)改造,獲得了較高生物活性的羧甲基茯苓多糖(CMP),并通過(guò)多步純化、組分分析、理化結(jié)構(gòu)性質(zhì)的鑒定,結(jié)果表明:CⅧ為多糖純品,未檢測(cè)出核酸、蛋白質(zhì)等雜質(zhì),
4、僅由羧甲基葡萄糖組成,C御是伊D構(gòu)型的葡聚\’!糖,糖環(huán)為吡喃型,糖苷鍵的連接方式為夕.<1-÷3),分子量大約為4.2×104Da,旋光度為.3.10,特性黏數(shù)為62.55。相對(duì)于原茯苓多糖,CⅧ的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)發(fā)生了一些變化,多糖的羧甲基化改造取得了一定的效果。關(guān)鍵詞:茯苓多糖發(fā)酵提取鑒定茯苓多糖的發(fā)酵、提取及其理化、結(jié)構(gòu)性質(zhì)鑒定的研究Abstract尸卯腸∞cDsw雒avaluable仃aditionalchillesemedicine,Pachymanw嬲themostefl’ectiVeing
5、redient.SoIneexpe血entsproofedttlatpachymancanimproVehuman’simmune凡nction,p陽(yáng)Vent鋤d仃10atnlecaIlcer.Pachym鋤c孤promOtecelldiVisiOn船well,suchaLs鋤ti·inflammatOry11hesebiologicalacti、ritiesaregraduallybemgcHnicallyusedandthemarketdemandisi11creaLsillg.Pachyman
6、hadhigllValueandpromisingpmspects.Atpresent,pachymallwaLSmainlyproducted行omtlle劬itbodyofartificialcultiVationorwild,whichlimitsitSuseforthelongcycIe,highcost鋤dlowyieldofproduction.Illthispaper,tlleliquidf.e肌entationcultureofPD,.砌∞c∞w舔carefIlllystudied.
7、ThepmcessOfpolysacch撕deisolatedf而mf.eHnentationbrotIlhadadVantages:shortcycle,lowcostandla唱eproduction,produciIlgpolysaccharideproductswithsanlestandardtomeett}lerequirementsofindustrialization.111isp印erstudiedonthebaSicbiologicalcharacterS0fPDv腸∞c∞byu
8、singHD06·l0aSthesubject,thmu曲t
9、lemyceliastaillingtechnique,nucleusdistributionresearchandmatingtestofsingle-spores.Fementationconditionssuch簽carbonsourceaIldni仃ogensourceforPD,.腸∞cDwereoptimized.Theoptimalfemlentationmediumcontained4%gl
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