血清總蛋白測定

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1、鄖縣中醫(yī)院檢驗科生化室作業(yè)指導書文件編號：檢驗科-SH-01版本/修訂號：1/0主題內(nèi)容血清總蛋白測定生效日期：2011-5-20第1頁共103頁血清總蛋白測定(雙縮脲法)1.實驗原理：凡分子中含有兩個甲酰氨基(-CONH2-)的化合物都能與堿性銅溶液作用，形成紫色復合物，這一反應稱雙縮脲反應。蛋白質(zhì)分子中有許多肽鍵(-CONH-），都能起此反應，而且各種血漿蛋白顯色程度基本相同.紫色復合物在540nm有吸收峰，并與蛋白含量成正比，通過與同樣處理的標準蛋白比較可求出血清總蛋白含量。因此，在嚴格控制條

2、件下，雙縮脲反應可作為血漿蛋白總量測定的理想方法，從測定的吸光度值計算出蛋白質(zhì)含量。吸光度的大小與試劑的組分、pH值、反應溫度有關。蛋白質(zhì)+銅離子NaOH紫紅色絡合物2.標本采集及存放：無特殊要求，最好用禁食的標本以減少乳糜血的干擾。離心后采集血清或肝素抗凝的血漿。血清標本20～25℃保存可穩(wěn)定6天；4～8℃保存可穩(wěn)定4周；-20℃保存至少可穩(wěn)定1年。3.實驗試劑及儀器：3.1試劑：使用北京利德曼總蛋白試劑盒。試劑組成如下成份含量酒石酸鉀鈉32mmol/L硫酸銅12mmol/L碘化鉀30mmol/L

3、NaoH600mmol/L3.2儀器及參數(shù)：3.2.1使用凱美雅生化分析儀，具體的操作詳見生化分析儀作業(yè)指導書.3.2.2分析參數(shù)：主波長540nm分析方法終點法副波長700nm反應方向向上反應溫度37℃S:R5：3004.質(zhì)量控制：在測定每一批標本前先做正常值和異常值來兩個水平的質(zhì)控品，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控（質(zhì)控規(guī)則見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程）。在控后方可進行標本測定，若失控，查明原因并采取措施。5.計算方法：樣本總蛋白含量＝×C0△At----------標本

4、管的吸光度變化；△As----------標準管的吸光度變化；C0-----------標準液的濃度；6.參考值范圍：健康成人走動后血清總蛋白濃度為64～83g/L，健康成人靜臥時，血清總蛋白濃度為60～78g/L。7.臨床意義:血清總蛋白有生理性波動，直立體位由于體液分布的原因，血液相對濃縮，而長久臥床者血液較直立體位相對稀釋。因此長久臥床者血清總蛋白比直立活動時約低3～5g/L；新生兒血清總蛋白可比成人低5～8g/L；60歲以上老人約比成人低2g/L。（1）總蛋白濃度增高：①血清中水分減少，使總

5、蛋白濃度相對增高。凡體內(nèi)水分的排出大于水分的攝入時，均可引起血漿濃縮，尤其是急性失水時(如嶇吐、腹瀉、高熱等)變化更為顯著，血清總蛋白濃度有時可達100～150g/L，又如休克時，由于毛細血管通透性的變化，血漿也可發(fā)生濃縮。慢性腎上腺皮質(zhì)功能減退患者，由于鈉的丟失而致繼發(fā)性水分丟失，血漿也可出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象。②血清蛋白質(zhì)合成增加。大多發(fā)生在多發(fā)性骨髓瘤患者，此時主要是球蛋白的增加，其量可超過50g/L，總蛋白則可超過100g/L。（2）血清總蛋白濃度降低：①血漿中水分增加，血漿被稀釋。如因各種原因引起的

6、水鈉潴留。②營養(yǎng)不良和消耗增加。長期食物中蛋白含量不足或慢性腸道疾病所引起的吸收不良.使體內(nèi)缺乏合成蛋白質(zhì)的原料，或因長期患消耗性疾病，如嚴重結(jié)核病、甲狀腺功能亢進和惡性腫瘤等，均可造成血清總蛋白濃度降低。③合成障礙，主要是肝功能障礙。肝臟功能嚴重損害時，蛋白質(zhì)的合成減少，以白蛋白的下降最為顯著。④蛋白質(zhì)丟失。嚴重燙傷時，大量血漿滲出，或大出血時，大量血液的丟失;腎病綜合征時，尿液中長期丟失蛋白質(zhì);潰瘍性結(jié)腸炎可從糞便中長期丟失一定量的蛋白質(zhì).這些均可使血清總蛋白濃度降低。8.附注：⑴干擾因素：①膽

7、紅素≤40mg/dl，血紅蛋白≤200mg/dl,抗壞血酸≤50mg/dl,乳糜1.6%時對檢測結(jié)果沒有影響。②酚酞、溴磺酞鈉在堿性溶液中呈色，影響雙縮脲的測定結(jié)果，右旋糖酐可使測定管混濁亦影響結(jié)果，理論上這些干擾均可吸光度太高，可影響測定的準確性。⑵方法局限性：本試劑線性上限為100g/L，如樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1:1稀釋，重新測定，結(jié)果乘以2。⑶危急值報告：無危急值。⑷注意事項:①血清蛋白質(zhì)的含量一般用g/L表示，因為各種蛋白質(zhì)的分子量不同，不能用mmol/L表示

8、。②脂類高的血清,呈色后混濁不清,可用乙醚抽提后再比色。③當采用50g/L的濃度標準液時，吸光度的變化范圍在0.10～0.35。9參考文獻：9.1葉應嫵、王毓三、申子瑜等.全國臨床檢驗操作規(guī)程【第三版】東南大學出版社，20069.2梁淑新、施俊英.臨床檢驗操作技術(shù)系列叢書生物化學檢驗分冊，軍事醫(yī)學出版社，2006鄖縣中醫(yī)院檢驗科生化室作業(yè)指導書文件編號：檢驗科-SH-02版本/修訂號：1/0主題內(nèi)容血清白蛋白測定生效日期：2011-5-20第5頁共103頁血清白蛋白測