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1、..生物化學實驗報告姓名：學號：專業(yè)年級：組別：.下載可編輯...生物化學與分子生物學實驗教學中心實驗名稱血清總蛋白測定（雙縮脲試劑法）實驗日期2014-11-21實驗地點第五實驗室合作者指導老師評分教師簽名批改日期一、實驗目的1、掌握雙縮脲測定血清總蛋白的基本原理、操作；2、熟悉血清總蛋白的臨床意義；3、了解雙縮脲法測定血清總蛋白的特點和注意事項。二、實驗原理（一）：雙縮脲反應在堿性溶液中,雙縮脲(H2NOC－NH－CONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡合物,這個反應叫做雙縮脲反應。兩分子尿素加熱脫氨縮合成的雙縮脲（H2N-OC-N
2、H-CO-NH2），因分子內含有兩個鄰接的肽鍵，在堿性溶液中可與Cu2+發(fā)生雙縮脲反應，生成紫紅色絡合物；蛋白質分子含有大量彼此相連的肽鍵（-CO-NH-），同樣能在堿性條件下與Cu2+發(fā)生雙縮脲反應，生成的紫紅色絡合物，且在540nm處的吸光度與蛋白質的含量在10～120g/L范圍內有良好的線性關系。三、材料與方法：實驗材料樣品：大牛血清試劑：雙縮脲試劑、蛋白質標準液（70g/L）、生理鹽水（0.9%）器材：試管、加樣槍、刻度吸管、洗耳球.下載可編輯...設備：1100分光光度計、水浴鍋實驗步驟取3支試管，做好標記(B空白對照，S標準液，U為待
3、測大牛血清)，按下表操作：加入物（ml）B(空白）S（標準）U（待測）大牛血清（1：10）--0.5蛋白標準液（1：10）-0.5-0.9%氯化鈉溶液0.5--雙縮脲試劑4.04.04.0a.各管混勻，觀察各試管顏色b.將各試管置于37℃水浴鍋中加熱20min，觀察顏色c.將試管中的液體倒入比色杯中，置于1100分光光度計的樣品槽內，在波長540nm，以空白管調零，測S和U管吸的光度。d.測定結束后，將比色杯中的樣品回收進試管依據公式算出結果三、結果與討論：（一）：實驗結果1、實驗現(xiàn)象：a、在實驗中首先加入雙縮脲試劑，再依次加入0.9%氯化鈉溶液
4、、蛋白質標準液、.下載可編輯...相應的大牛血清后溶液沒有明顯的顏色變化，呈淡藍色透明狀；a、水浴20分鐘之后，B試管試管顯淡藍色；S試管和U試管顯淺紫色且S試管的顏色比U試管的顏色稍深。2、實驗數(shù)據：管號測定次數(shù)平均吸光度123S0.1870.1880.1870.1873U0.1200.1190.1190.11933、結果計算：將大牛血清和蛋白標準液的平均吸光度帶入公式：血清總蛋白（g/L)=(Au/As)X蛋白質標準液濃度（g/L),得出結果：血清總蛋白=44.586g/L（二）：結果討論查閱資料得知，大牛血清總蛋白含量一般為60-80g/L
5、,可是，實驗結果卻是44.586g/L,即使按照實驗要求及步驟操作,結果還是出現(xiàn)了比較大的誤差，實驗結果經過討論，分析如下：1、成功的方面：a.在本次試驗出現(xiàn)了預期的結果：S和U試管溶液顯淡紫色，B試管顯淡藍色。S和U試管顯淡紫色是因為蛋白質發(fā)生了雙縮脲反應，但是由于蛋白質的含量偏少顯色較淺，B試管顯淺藍色的原因是B試管中沒有發(fā)生任何反應，顯雙縮脲試劑的淡藍色。b.水浴，吸光度測試等環(huán)節(jié)都能夠按照預定的步驟進行，操作比較嚴謹。2、誤差分析：a.所測得的蛋白質含量偏低，可能是由于樣品存儲不當，造成待測的大牛蛋白水解，待測樣品中的蛋白質總量本身就很低
6、.下載可編輯...a.待測的大牛蛋白溶液正常，但是，標準蛋白溶液的濃度比標示的高，造成測量結果偏低b.操作過程有偏差，由于量取蛋白質溶液的量比較少，在每個加樣步驟的少量偏差，都會造成結果誤差較大五：結論樣品的蛋白質含量偏低復習思考題1.什么叫雙縮脲試劑？為什么要在雙縮脲試劑中加入酒石酸鉀鈉和碘化鉀？雙縮脲試劑2.試劑配制過程中，為何NaOH要單獨配制，最后加入？3.簡述血清總蛋白測定的臨床意義。.下載可編輯.
