資源描述：
《血清總蛋白測定(雙縮脲試劑法).doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、..生物化學(xué)實驗報告姓名：學(xué)號：專業(yè)年級：組別：.下載可編輯...生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗教學(xué)中心實驗名稱血清總蛋白測定（雙縮脲試劑法）實驗日期2014-11-21實驗地點第五實驗室合作者指導(dǎo)老師評分教師簽名批改日期一、實驗?zāi)康?、掌握雙縮脲測定血清總蛋白的基本原理、操作；2、熟悉血清總蛋白的臨床意義；3、了解雙縮脲法測定血清總蛋白的特點和注意事項。二、實驗原理（一）：雙縮脲反應(yīng)在堿性溶液中,雙縮脲(H2NOC－NH－CONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物,這個反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。兩分子尿素加熱脫氨縮合成的雙縮脲（H2N-OC-N
2、H-CO-NH2），因分子內(nèi)含有兩個鄰接的肽鍵，在堿性溶液中可與Cu2+發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，生成紫紅色絡(luò)合物；蛋白質(zhì)分子含有大量彼此相連的肽鍵（-CO-NH-），同樣能在堿性條件下與Cu2+發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，生成的紫紅色絡(luò)合物，且在540nm處的吸光度與蛋白質(zhì)的含量在10～120g/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。三、材料與方法：實驗材料樣品：大牛血清試劑：雙縮脲試劑、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（70g/L）、生理鹽水（0.9%）器材：試管、加樣槍、刻度吸管、洗耳球.下載可編輯...設(shè)備：1100分光光度計、水浴鍋實驗步驟取3支試管，做好標(biāo)記(B空白對照，S標(biāo)準(zhǔn)液，U為待
3、測大牛血清)，按下表操作：加入物（ml）B(空白）S（標(biāo)準(zhǔn)）U（待測）大牛血清（1：10）--0.5蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（1：10）-0.5-0.9%氯化鈉溶液0.5--雙縮脲試劑4.04.04.0a.各管混勻，觀察各試管顏色b.將各試管置于37℃水浴鍋中加熱20min，觀察顏色c.將試管中的液體倒入比色杯中，置于1100分光光度計的樣品槽內(nèi)，在波長540nm，以空白管調(diào)零，測S和U管吸的光度。d.測定結(jié)束后，將比色杯中的樣品回收進試管依據(jù)公式算出結(jié)果三、結(jié)果與討論：（一）：實驗結(jié)果1、實驗現(xiàn)象：a、在實驗中首先加入雙縮脲試劑，再依次加入0.9%氯化鈉溶液
4、、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液、.下載可編輯...相應(yīng)的大牛血清后溶液沒有明顯的顏色變化，呈淡藍(lán)色透明狀；a、水浴20分鐘之后，B試管試管顯淡藍(lán)色；S試管和U試管顯淺紫色且S試管的顏色比U試管的顏色稍深。2、實驗數(shù)據(jù)：管號測定次數(shù)平均吸光度123S0.1870.1880.1870.1873U0.1200.1190.1190.11933、結(jié)果計算：將大牛血清和蛋白標(biāo)準(zhǔn)液的平均吸光度帶入公式：血清總蛋白（g/L)=(Au/As)X蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液濃度（g/L),得出結(jié)果：血清總蛋白=44.586g/L（二）：結(jié)果討論查閱資料得知，大牛血清總蛋白含量一般為60-80g/L
5、,可是，實驗結(jié)果卻是44.586g/L,即使按照實驗要求及步驟操作,結(jié)果還是出現(xiàn)了比較大的誤差，實驗結(jié)果經(jīng)過討論，分析如下：1、成功的方面：a.在本次試驗出現(xiàn)了預(yù)期的結(jié)果：S和U試管溶液顯淡紫色，B試管顯淡藍(lán)色。S和U試管顯淡紫色是因為蛋白質(zhì)發(fā)生了雙縮脲反應(yīng)，但是由于蛋白質(zhì)的含量偏少顯色較淺，B試管顯淺藍(lán)色的原因是B試管中沒有發(fā)生任何反應(yīng)，顯雙縮脲試劑的淡藍(lán)色。b.水浴，吸光度測試等環(huán)節(jié)都能夠按照預(yù)定的步驟進行，操作比較嚴(yán)謹(jǐn)。2、誤差分析：a.所測得的蛋白質(zhì)含量偏低，可能是由于樣品存儲不當(dāng)，造成待測的大牛蛋白水解，待測樣品中的蛋白質(zhì)總量本身就很低
6、.下載可編輯...a.待測的大牛蛋白溶液正常，但是，標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液的濃度比標(biāo)示的高，造成測量結(jié)果偏低b.操作過程有偏差，由于量取蛋白質(zhì)溶液的量比較少，在每個加樣步驟的少量偏差，都會造成結(jié)果誤差較大五：結(jié)論樣品的蛋白質(zhì)含量偏低復(fù)習(xí)思考題1.什么叫雙縮脲試劑？為什么要在雙縮脲試劑中加入酒石酸鉀鈉和碘化鉀？雙縮脲試劑2.試劑配制過程中，為何NaOH要單獨配制，最后加入？3.簡述血清總蛋白測定的臨床意義。.下載可編輯.
