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1、蝎毒抗癌多肽對(duì)卵巢癌細(xì)胞株生長(zhǎng)抑制及凋亡的影響論文徐波王潔曾建華魏蓮【摘要】目的：研究蝎毒抗癌多肽體外能否抑制卵巢癌細(xì)胞株3AO的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡。方法：采用噻唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)蝎毒抗癌多肽體外對(duì)卵巢癌細(xì)胞株3AO的生長(zhǎng)與增殖的影響、流式細(xì)胞儀的方法進(jìn)行凋亡峰的檢測(cè)。結(jié)果：蝎毒抗癌多肽體外作用于卵巢癌細(xì)胞株3AO后，能明顯抑制其生長(zhǎng)，并呈劑量效應(yīng)關(guān)系。流式細(xì)胞儀檢測(cè)到了細(xì)胞凋亡峰，且峰值也呈劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論：蝎毒抗癌多肽體外能抑制卵巢癌細(xì)胞株3AO的生長(zhǎng)，并能誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡?！娟P(guān)鍵詞】蝎毒抗癌多肽；卵巢癌；凋亡P
2、olypeptideExtractFromScorpionVenom(PESV)InhibitsProliferationandInducesApoptosisonOvarianCancerCellLines3AOinVitro〔Abstract〕ObjectiveTostudyinedbyMTT.Apoptoticpeakinedbyfloetry.ResultsPESVcouldinhibitproliferationofovariancancercelllines3AOinvitroandithadsomedose
3、-effectrelation.Apoptoticpeaketryanditalsohadsomedose-effectrelation.ConclusionPESVcaninhibitproliferationandinduceapoptosisonovariancancercelllines3AOinvitro.〔KeyTT法、流式細(xì)胞術(shù)、探討PESV對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及增殖的抑制作用和誘導(dǎo)凋亡的作用。1材料與方法1.1卵巢癌細(xì)胞株3AO，重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)研究所提供，用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，含10%小牛血清，
4、2mmol/L谷氨酰胺，用0.1%胰酶消化傳代。1.2PESV由廣州醫(yī)學(xué)院提供，經(jīng)冷凍干燥后的PESV于-20℃保存，使用時(shí)配成所需濃度。1.3細(xì)胞增殖分析用MTT法分析PESV對(duì)3AO卵巢癌細(xì)胞株細(xì)胞增殖活性的影響。實(shí)驗(yàn)分調(diào)零孔（等體積培養(yǎng)液）、陰性對(duì)照組（培養(yǎng)液和單細(xì)胞懸液）、順鉑組（培養(yǎng)液、單細(xì)胞懸液和順鉑），PESV組（培養(yǎng)液、單細(xì)胞懸液和PESV），細(xì)胞接種于96孔板，細(xì)胞數(shù)為每孔8×100個(gè)/100L，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，接種24h后，分別加入不同濃度的順鉑和PESV，繼續(xù)培養(yǎng)48h后加入20L濃度為5mg/
5、mL的MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄去培養(yǎng)基后每孔加入200LDMSO，充分溶解后，用酶標(biāo)儀于570nm波長(zhǎng)下讀取每孔的吸光度A（OD值）。細(xì)胞增殖抑制率（IR）按以下公式計(jì)算：1.4流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同藥物處理48h后，將處理后的細(xì)胞用0.1%胰蛋白酶消化，PBS吹打成單個(gè)細(xì)胞懸液。離心后用70%乙醇固定過(guò)夜。記數(shù)細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)不少于5×104/mL。加PI染色液，染色約20min，進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，CellQuest和ModFitLT軟件分析結(jié)果。2結(jié)果2.1MTT結(jié)果MTT結(jié)果顯示隨著PESV濃度的增加，對(duì)卵巢癌細(xì)
6、胞株3AO的生長(zhǎng)抑制作用越來(lái)越明顯，呈劑量效應(yīng)關(guān)系。（當(dāng)劑量增加至60g/mL，120g/mL時(shí)，IR分別增加為42.1%和61.2%，與陰性對(duì)照組相比，P0.05），順鉑在2g/mL時(shí)也開(kāi)始對(duì)卵巢癌細(xì)胞株3AO產(chǎn)生明顯的抑制作用，也呈劑量效應(yīng)關(guān)系，見(jiàn)表1。2.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)經(jīng)PESV處理后的卵巢癌細(xì)胞株3AO細(xì)胞，可見(jiàn)凋亡峰的出現(xiàn)，且峰值隨處理濃度的加大而增大（見(jiàn)圖1、圖2）。未處理的卵巢癌細(xì)胞株3AO細(xì)胞不能檢測(cè)到凋亡峰（見(jiàn)圖3）。3討論卵巢癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤之一，近年來(lái)，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。對(duì)卵
7、巢癌的治療主要以手術(shù)和化療為主，但因其難以早期發(fā)現(xiàn)及早期治療，預(yù)后往往不佳。我國(guó)的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)博大精深，有豐富的中醫(yī)藥資源，科研工作者已經(jīng)不斷從我國(guó)傳統(tǒng)中藥中發(fā)現(xiàn)了許多具有抗癌療效的藥物，應(yīng)用于臨床，取得了較好的療效1。大量的實(shí)驗(yàn)研究證明，蝎毒多肽提取物可抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖與生長(zhǎng)，本研究也表明，當(dāng)PESV濃度在60g/mL時(shí)，能顯著抑制卵巢癌細(xì)胞株3AO的增殖與生長(zhǎng)，細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到42.1%，當(dāng)PESV濃度加大到120g/mL時(shí)，細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到61.2%，呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。許多的研究表明，PESV具有抑制腫瘤
8、細(xì)胞增殖的作用，其機(jī)理可能是通過(guò)影響細(xì)胞周期的進(jìn)行，使G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，從而達(dá)到細(xì)胞增殖的抑制作用2。我們將在今后的工作中做進(jìn)一步的研究。凋亡是生物體內(nèi)普遍存在的一種生理性現(xiàn)象，細(xì)胞的增殖與凋亡相互平衡才能維持組織器官正常的生理功能和細(xì)胞數(shù)的穩(wěn)定。如果細(xì)胞增殖和凋亡的平衡被打破則可以導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。隨著凋
