蝎毒抗癌多肽對卵巢癌細胞株生長抑制及凋亡的影響論文

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1、蝎毒抗癌多肽對卵巢癌細胞株生長抑制及凋亡的影響論文徐波王潔曾建華魏蓮【摘要】目的:研究蝎毒抗癌多肽體外能否抑制卵巢癌細胞株3AO的生長及誘導其發(fā)生凋亡。方法:采用噻唑藍(MTT)法檢測蝎毒抗癌多肽體外對卵巢癌細胞株3AO的生長與增殖的影響、流式細胞儀的方法進行凋亡峰的檢測。結果:蝎毒抗癌多肽體外作用于卵巢癌細胞株3AO后,能明顯抑制其生長,并呈劑量效應關系。流式細胞儀檢測到了細胞凋亡峰,且峰值也呈劑量效應關系。結論:蝎毒抗癌多肽體外能抑制卵巢癌細胞株3AO的生長,并能誘導其發(fā)生凋亡?!娟P鍵詞】蝎毒抗癌多肽;卵巢癌;凋亡P

2、olypeptideExtractFromScorpionVenom(PESV)InhibitsProliferationandInducesApoptosisonOvarianCancerCellLines3AOinVitro〔Abstract〕ObjectiveTostudyinedbyMTT.Apoptoticpeakinedbyfloetry.ResultsPESVcouldinhibitproliferationofovariancancercelllines3AOinvitroandithadsomedose

3、-effectrelation.Apoptoticpeaketryanditalsohadsomedose-effectrelation.ConclusionPESVcaninhibitproliferationandinduceapoptosisonovariancancercelllines3AOinvitro.〔KeyTT法、流式細胞術、探討PESV對卵巢癌細胞的生長及增殖的抑制作用和誘導凋亡的作用。1材料與方法1.1卵巢癌細胞株3AO,重慶醫(yī)科大學基礎研究所提供,用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng),含10%小牛血清,

4、2mmol/L谷氨酰胺,用0.1%胰酶消化傳代。1.2PESV由廣州醫(yī)學院提供,經(jīng)冷凍干燥后的PESV于-20℃保存,使用時配成所需濃度。1.3細胞增殖分析用MTT法分析PESV對3AO卵巢癌細胞株細胞增殖活性的影響。實驗分調零孔(等體積培養(yǎng)液)、陰性對照組(培養(yǎng)液和單細胞懸液)、順鉑組(培養(yǎng)液、單細胞懸液和順鉑),PESV組(培養(yǎng)液、單細胞懸液和PESV),細胞接種于96孔板,細胞數(shù)為每孔8×100個/100L,每個濃度設3個復孔,接種24h后,分別加入不同濃度的順鉑和PESV,繼續(xù)培養(yǎng)48h后加入20L濃度為5mg/

5、mL的MTT,繼續(xù)培養(yǎng)4h,棄去培養(yǎng)基后每孔加入200LDMSO,充分溶解后,用酶標儀于570nm波長下讀取每孔的吸光度A(OD值)。細胞增殖抑制率(IR)按以下公式計算:1.4流式細胞儀檢測細胞經(jīng)過不同藥物處理48h后,將處理后的細胞用0.1%胰蛋白酶消化,PBS吹打成單個細胞懸液。離心后用70%乙醇固定過夜。記數(shù)細胞,細胞數(shù)不少于5×104/mL。加PI染色液,染色約20min,進行流式細胞儀檢測,CellQuest和ModFitLT軟件分析結果。2結果2.1MTT結果MTT結果顯示隨著PESV濃度的增加,對卵巢癌細

6、胞株3AO的生長抑制作用越來越明顯,呈劑量效應關系。(當劑量增加至60g/mL,120g/mL時,IR分別增加為42.1%和61.2%,與陰性對照組相比,P0.05),順鉑在2g/mL時也開始對卵巢癌細胞株3AO產(chǎn)生明顯的抑制作用,也呈劑量效應關系,見表1。2.2流式細胞儀檢測用流式細胞儀檢測經(jīng)PESV處理后的卵巢癌細胞株3AO細胞,可見凋亡峰的出現(xiàn),且峰值隨處理濃度的加大而增大(見圖1、圖2)。未處理的卵巢癌細胞株3AO細胞不能檢測到凋亡峰(見圖3)。3討論卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤之一,近年來,其發(fā)病率呈上升趨勢。對卵

7、巢癌的治療主要以手術和化療為主,但因其難以早期發(fā)現(xiàn)及早期治療,預后往往不佳。我國的傳統(tǒng)醫(yī)學博大精深,有豐富的中醫(yī)藥資源,科研工作者已經(jīng)不斷從我國傳統(tǒng)中藥中發(fā)現(xiàn)了許多具有抗癌療效的藥物,應用于臨床,取得了較好的療效1。大量的實驗研究證明,蝎毒多肽提取物可抑制多種腫瘤細胞的增殖與生長,本研究也表明,當PESV濃度在60g/mL時,能顯著抑制卵巢癌細胞株3AO的增殖與生長,細胞增殖抑制率達到42.1%,當PESV濃度加大到120g/mL時,細胞增殖抑制率達到61.2%,呈明顯的劑量效應關系。許多的研究表明,PESV具有抑制腫瘤

8、細胞增殖的作用,其機理可能是通過影響細胞周期的進行,使G1期細胞增多,S期細胞減少,從而達到細胞增殖的抑制作用2。我們將在今后的工作中做進一步的研究。凋亡是生物體內普遍存在的一種生理性現(xiàn)象,細胞的增殖與凋亡相互平衡才能維持組織器官正常的生理功能和細胞數(shù)的穩(wěn)定。如果細胞增殖和凋亡的平衡被打破則可以導致腫瘤的發(fā)生。隨著凋

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