丹參有效成分的分離與提取

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1、丹參有效成分的分離與提取【關(guān)鍵詞】丹參；隱丹參酮；丹參酮ⅡA丹參為唇形科多年生草本植物,丹參的干燥根及根莖，主產(chǎn)于四川、安徽、江蘇及河南等省。春秋兩季采挖，除去莖葉泥沙，須根曬干。其根莖短粗，頂端有殘留莖基，根數(shù)條，長圓柱形，略彎曲，有的分枝并有須狀細根，長10-20cm，直徑0.3-1cm，表面棕紅色或暗棕紅色，粗糙，具縱皺紋，老根外皮疏松，多顯紫棕色，常呈鱗片狀脫質(zhì)硬而脆，斷面疏松，有裂隙或略平整而致密，皮部棕紅色，本部灰黃色或紫色，導(dǎo)管束黃白色，呈放射狀排列，氣微，味微苦澀。丹參有效成分主要有脂溶性非醌色素類化合物，如丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB、隱丹參酮及其異構(gòu)

2、體。水溶性酚酸類成分如原兒茶醛、丹參素。其中，隱丹參酮是抗菌的有效成分。1材料與方法1.1材料與試劑丹參粉末，乙醇，苯，氧化鋁，丙酮。1.2實驗方法取丹參粉末，用乙醇熱煮，煮沸15-20min，用苯洗脫過濾，洗脫液經(jīng)氧鋁(Ⅲ級)層析，再用苯洗脫，樣品呈紫色樣段，橙紅色樣段，暗紅色樣段，取橙紅色樣段經(jīng)過苯洗脫，再用丙酮洗脫，呈板狀結(jié)晶，為丹參酸甲脂，呈橙紅色結(jié)晶，為隱丹參酮。將暗紅色樣段，氧化鋁棒置容器中，經(jīng)苯洗脫，再用丙酮洗脫，呈暗紅色結(jié)晶，為丹參酮ⅡA。隱丹參酮與丹參酮ⅡA為脂溶性成分，樣品的甲醇提取液，回收溶劑至干，殘渣溶于氯仿期濾，濾液加水振搖靜止，取氯仿層

3、濃縮至干，加氯仿顯色。原兒茶醛、丹參素為水溶性成分，用熒光法鑒別。取本品粉末，置白瓷板上，于紫外燈(365mm)下檢視，呈灰色熒光，即原兒茶醛。薄層色譜法:樣品水提液，濃縮后，以80%醇沉，用鹽酸調(diào)值，pH2，乙醚萃取，醚提取液揮去乙醚，用乙醇溶液，點于硅膠G(或H)—羧甲基纖維素鈉薄層板上，先以苯—乙酸—乙甲酸(4∶4∶1)展開1cm取出揮溶劑再以苯—乙酸乙酯—甲酸(80∶50∶8)展開，以三氯化鐵—鐵氰化鉀(1∶1)試劑顯色。1.2.1指紋圖譜參照高效液相色譜法(《中國藥典》2000版1部VID)測定。系統(tǒng)適用性試驗十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，流速0.5mL

4、/min，檢測波長為281nm，理論板數(shù)按原兒茶醛峰計算，應(yīng)不低于5000，見表1、表2。表1二元梯度洗脫參數(shù)表2特征峰相對保留時間表3特征峰標準相對峰面積1.2.2對照品溶液的制備取原兒茶醛對照品適量，精密稱定，加甲醇制成相當于每2mL含原兒茶醛0.01mg的溶液，搖勻，即得。1.2.3供試品溶液的制備取含量測定項下供試品溶液。1.2.4測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10mL，注入液相色譜儀，根據(jù)色譜峰面積，按照指紋圖譜技術(shù)要求測定，即得。1.2.5確定10個特征峰1號峰為丹參，2號峰為原兒茶醛(參照物S)，10號峰為丹酚酸B。指紋圖譜見圖1。圖1丹

5、參HPLC指紋圖譜1.2.6丹參素的鑒別1.2.6.1取本品粉末5g，加水50mL，煎煮15-20min，放冷，濾過，濾液置水浴上濃縮至粘稠狀，放冷后，加乙醇3-5mL使溶解，濾過，取濾液數(shù)滴，點于濾紙上。午后，置紫外線燈(365nm)下觀察，顯亮藍灰色熒光，將濾紅懸掛在濃氨溶液瓶中(不接觸液面)，20min后取出，置紫外燈(365nm)下觀察，顯亮藍灰色熒光。1.2.6.2取前項下的濾液0.5mL，加三氯化鐵液1-2滴，顯污綠色。1.2.6.3取本品粉末1g加乙醇0.5mL，置具塞試管中，振搖，放置1h，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1mL溶解作為供試品溶液。另

6、取，丹參對照藥材1g，同法制成對照液藥材溶液再取丹參酮ⅡA對照品加醋酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版的1部附錄VIB)試驗，吸取上述3種溶液各5mL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯—醋酸乙酯(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅色斑點。1.2.7原兒茶醛的鑒別1.2.7.1樣品的水提液濃縮用鹽酸調(diào)至pH2，乙醚萃取，醚提液揮去乙醚，用乙醇溶解，點于硅膠G(或H)CMC板上，以苯乙酸乙酯甲醇(80：50：

7、8)展開。以氯化鐵鐵氰化鉀(1∶1)試劑顯色。1.2.7.2樣品前項下的制備點樣液。點于硅膠HCMC板上，以(Ⅰ)苯乙酸乙酯甲酸(80∶70∶8)或(Ⅱ)氯仿丙酮甲醇甲酸(70∶20∶15∶5)展開，紫外燈下檢視后噴三氯化鐵、鐵氰化鉀(1∶1)試劑，再將薄板置0.1MHCL中泡數(shù)分鐘，流水沖去酸液顯色。2實驗結(jié)果2.1化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖2。圖2參照高效液相色譜法(《中國藥典》2000版1部VID)測定。2.2系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；甲醇水醋酸(8∶91∶1)為流動相；檢測波表為281nm。理論板數(shù)按丹參素峰計算，應(yīng)低于2000。2.3對

8、照品溶液的