雌激素對(duì)老年雌鼠陰道nos及雌激素受體的影響

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1、雌激素對(duì)老年雌鼠陰道NOS及雌激素受體的影響作者：饒婷張孝斌吳飛程帆葛名歡袁友光【摘要】目的研究雌激素對(duì)老年雌性大鼠陰道組織一氧化氮合酶（NOS）活性及雌激素受體（ER）亞型的影響，探討雌激素作用于女性性功能的可能機(jī)制。方法SD雌性大鼠分三組：青年組（3月齡）、老年組（20月齡）、苯甲酸雌二醇治療組，比色法檢測(cè)陰道組織NOS的活性，免疫組化法檢測(cè)ERα和β的表達(dá)。結(jié)果老年大鼠陰道NOS活性下降，而陰道上皮細(xì)胞ERα、平滑肌細(xì)胞ERα和ERβ表達(dá)增加，雌激素治療能逆轉(zhuǎn)這些變化。大鼠血清雌二醇濃度與陰道組織NOS活性呈正相關(guān)，兩者均與陰道上皮細(xì)胞ERα、平滑肌

2、細(xì)胞ERα和ERβ呈負(fù)相關(guān)，而與大鼠陰道上皮細(xì)胞ERβ、基質(zhì)纖維細(xì)胞ERα和ERβ無相關(guān)性。結(jié)論雌激素可以通過調(diào)節(jié)陰道NOS維持女性性功能，這一過程與陰道上皮細(xì)胞ERα、平滑肌細(xì)胞ERα和ERβ密切相關(guān)。【關(guān)鍵詞】雌激素；女性性功能障礙；一氧化氮合酶；雌激素受體伴隨老齡化和絕經(jīng)期的到來，血雌激素水平下降，女性性功能障礙（FSD）發(fā)生率顯著增加〔1，2〕，嚴(yán)重影響著女性生活質(zhì)量。雌激素是維持女性性反應(yīng)的重要內(nèi)分泌因素，但其具體機(jī)制仍不清楚。近來研究發(fā)現(xiàn)，硝普鈉和左旋精氨酸可促進(jìn)兔陰蒂海綿體平滑肌的舒張〔3〕；在人體中，西地那非能增加陰蒂動(dòng)脈血供，改善女性性喚

3、起、性高潮和性快感等FSD問題〔4〕。因此，與男性勃起功能機(jī)制類似，由一氧化氮合酶（NOS）催化L精氨酸生成的一氧化氮（NO）在女性性反應(yīng)機(jī)制中亦有著重要作用。由此推測(cè)雌激素對(duì)女性性功能的調(diào)節(jié)機(jī)制中，NO為重要的中間環(huán)節(jié)，但雌激素如何調(diào)節(jié)NO進(jìn)而維持女性性反應(yīng)，尚需實(shí)驗(yàn)探討。已知雌激素通過雌激素受體（ER）介導(dǎo)其生物效應(yīng)，ER分為ERα和ERβ兩種亞型，廣泛分布于全身各部位，本研究通過觀察雌激素對(duì)雌性大鼠陰道組織NOS活性及ER亞型的影響，探討雌激素維持女性性反應(yīng)的可能機(jī)制。　　1材料與方法　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年雌性SPF級(jí)SD未生育大鼠30只購(gòu)于武漢大

4、學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，隨機(jī)分為3組：青年組（3月齡）10只，肌肉注射麻油0.1ml；老年組（20月齡）10只，肌肉注射麻油0.1ml；雌激素治療組10只，20月齡老年大鼠肌肉注射生理劑量1mg/kg苯甲酸雌二醇。藥物注射隔日一次，共30d。苯甲酸雌二醇由上海第九制藥廠生產(chǎn)，用麻油稀釋?！　?.2大鼠血清17β雌二醇水平放射免疫測(cè)定用藥30d后，大鼠以水合氯醛麻醉，心臟穿刺取血2ml以3000r/min離心5min后將血清移入EP管，-20℃保存，用放射免疫熒光法（試劑盒購(gòu)于北京科美東雅生物技術(shù)有限公司）統(tǒng)一測(cè)定雌激素?！　?.3NOS活力的檢測(cè)取一定量新鮮標(biāo)

5、本，稱重加9倍重的生理鹽水制備成10%的組織勻漿，3000r/min離心10min；按試劑盒說明書操作，取上清液200μl測(cè)NOS活力（NOS測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所），10μl測(cè)蛋白含量（BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒，武漢博士德生物有限公司）。NOS催化L精氨酸和分子氧反應(yīng)生成NO，NO與親核性物質(zhì)生成有色物，在530nm的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，根據(jù)吸光度的大小可以計(jì)算出NOS活力?！　?.4免疫組織化學(xué)染色陰道組織10%中性甲醛固定，石蠟包埋。采用鏈霉卵白素過氧化物酶法(SP法)檢測(cè)大鼠陰道組織ERα/β水平。一抗為兔多克隆抗體ERα（Santa

6、CruzBiotechnology,1∶100）和兔多克隆抗體ERβ（Upstate,1∶50），二抗為羊抗兔IgG。SP試劑盒和濃縮型DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。用ImageproPlus圖像分析系統(tǒng)分析陽(yáng)性染色結(jié)果，每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)視野，測(cè)其平均光密度值（OD值）?！　?.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)以x±s表示，統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，單因素方差分析和直線相關(guān)分析?！　?結(jié)果　　2.1大鼠血清17β雌二醇含量老年組血清17β雌二醇含量為(13

7、.81±5.11)pg/ml，顯著低于青年組(33.70±11.99)pg/ml和雌激素治療組(34.32±7.47)pg/ml(P＝0.000)?！　?.2大鼠陰道NOS活性老年組陰道NOS活性為(4.17±1.81)U/mg·prot，顯著低于青年組(10.68±2.0)U/mg·prot和雌激素治療組(11.07±2.36)U/mg·prot(P＝0.000)。相關(guān)分析顯示，大鼠陰道NOS活性與血清雌二醇濃度呈正相關(guān)（r＝0.798，P＝0.000）?！　?.3大鼠陰道ERα和ERβ免疫組化染色結(jié)果兩種ER亞型在陰道組織中均有表達(dá)，在ERα免疫組化切

8、片中，棕黃色顆粒主要位于細(xì)胞核內(nèi)；在ERβ免疫組化切片中，棕黃色顆