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《原發(fā)性肝癌組織中肝素酶表達與肝癌侵襲 轉(zhuǎn)移關系的研究論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、原發(fā)性肝癌組織中肝素酶表達與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移關系的研究論文.freelRNA及Hpa蛋白在肝細胞肝癌、癌旁肝組織及肝癌細胞株中的表達。結果肝癌HpamRNA和蛋白的表達顯著高于癌旁及正常肝組織(P0.05),肝癌組織中HpamRNA的表達與TNM分期、Edmondson分級和復發(fā)有關(P0.05)。結論HpamRNA及蛋白在肝癌中高表達,并與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移、復發(fā)、預后有關。【關鍵詞】肝細胞肝癌乙酰肝素酶侵襲轉(zhuǎn)移復發(fā)【Abstract】ObjectiveThemainaimofthisinvestigationistoexploretheexpress
2、ionofheparanasemRNAandproteininhepatocellularcarcinoma(HCC)anditsrelationshiperasechainreaction(RT-PCR)andimmunohistochemicalstainingRNAandproteininnormalhepatictissues,tumortissuesandadjacenttissuesofhepatocellularcarcinoma.ResultsTheexpressionofHpamRNAandproteininHCCtissues
3、alhepatictissues(P0.05).Itondson-Steiner’sclassification(P0.05).ConclusionOverexpressionoftheheparanasemRNAandproteinrelatestotheinvasion,metastasis,recurrenceandprognosisofhepatocellularcarcinoma.【KeyaHeparanaseInvasionMetastasisRecurrence乙酰肝素酶(heparanase,HPA)是1999年克隆分離出的一種葡
4、糖苷酸內(nèi)切酶。它可降解硫酸乙酰肝素(hearansulfate,HS),破壞細胞外基質(zhì)和血管基底膜,并促進腫瘤新生血管生成,使腫瘤細胞實現(xiàn)侵襲轉(zhuǎn)移。作者運用RT-PCR和免疫組織化學法對HpamRNA及Hpa蛋白在肝細胞肝癌、癌旁肝組織及肝癌細胞株中的表達進行檢測,檢測33例原發(fā)性肝細胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)標本中HPA的基因表達,.freel8例,＞5cm25例;癌灶包膜完整14例、不完整19例;甲胎蛋白(AFP)陽性26例、陰性7例;HBsAg陽性27例、陰性6例;合并明顯肝硬化18例、無明顯肝硬化15
5、例;腫瘤EdmondsonⅠ、Ⅱ級13例、Ⅲ、Ⅳ級20例;TNMⅠ、Ⅱ期18例、Ⅲ、Ⅳ期15例。隨訪有和無轉(zhuǎn)移復發(fā)各14例。肝臟良性腫瘤9例中男4例,女5例;年齡32～65歲,平均41歲;其中肝海綿狀血管瘤8例、肝局灶性結節(jié)性增生1例。1.2總RNA提取和半定量RT-PCR檢測Trizol總RNA分離試劑盒(Gibco)Trizol一步法提取組織總RNA,甲醛變性膠電泳鑒定及紫外分光光度儀測定OD值后,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。AMV為TaKaRa公司產(chǎn)品,dNTP購自上海生物工程公司。HPA引物參照文獻［１］設計,由上海生物工程公司合成,上游為5’-
6、2TTCGATCC2CAAGAAGGAATCAAC23’,下游為5-2GATTCAGTTA2CATGGCATCACTAC-3’,其擴增片段長度為585bp。采用β2actin作為內(nèi)參照,其引物由上海博亞生物公司合成,上游序列為5’2TTCCAGCCTTCCTTCCTGG23’,下游為5’2ATTGCTCCTCCTGAGCGCAA23’,擴增片段長度為224bp。按50μl反應體系行PCR擴增。TagTMDNA聚合酶為TaKaRa產(chǎn)品。HPA擴增條件為94℃預變性4min,后轉(zhuǎn)入94℃變性30s、57℃退火45s、72℃延伸1min循環(huán),共35個周
7、期,然后再72℃延伸5min。取10μl產(chǎn)物于112%的瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙錠紫外燈下觀察拍照。1.3免疫組織化學染色方法及結果判定標本常規(guī)甲醛固定取材、脫水、石蠟包埋后做4μm連續(xù)切片,按SP免疫組織化學染色試劑盒染色步驟進行,Hpa表達陽性為細胞漿染成棕黃色,在光鏡下觀察5個高倍視野,計算陽性細胞數(shù),陽性細胞數(shù)≤10%為陰性表達,10%為陽性表達。1.4統(tǒng)計學處理結果數(shù)據(jù)采用χ2檢驗或四格表確切概率法分析。2結果2.1HPAmRNA在肝癌組織中的表達經(jīng)RT-PCR擴增后電泳觀察發(fā)現(xiàn)33例HCC癌組織中有16例HPA表達陽性,陽性率為48%(
8、16/33);而癌旁肝組織僅1例HPA表達呈陽性;9例正常肝組織均陰性。經(jīng)統(tǒng)計學處理P值＜0101分別(前者χ2值171827,P010
