葛根素對肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷保護作用及其保護機制的研究

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1、葛根素對肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷保護作用及其保護機制的研究孫鵬，李五生，張楠，周小娜，劉金龍【摘要】目的觀察葛根素（Pue）對肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷是否具有保護作用，及其保護機制。方法首先建立大鼠肝硬化動物模型，在此模型基礎(chǔ)上建立大鼠全肝缺血再灌注模型，比較用Pue預(yù)處理對缺血再灌注后，肝組織光鏡下的形態(tài)學(xué)改變；血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和氧化亞氮（NO）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性，及肝組織中NO、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、MDA含量、SOD活性變化。結(jié)果Pue預(yù)處理可使大鼠血清NO含量、肝組織NO含量及SOD活性明顯

2、增高；而血清ALT、AST、MDA含量及肝組織TNF-α、MDA含量明顯降低；肝組織形態(tài)損傷也有所減輕。結(jié)論葛根素對肝硬化大鼠肝缺血再灌注損傷有顯著的保護作用，其主要機制是減少NO的降低、擴張血管、改善微循環(huán)；清除氧自由基、減輕脂質(zhì)過氧化。【關(guān)鍵詞】葛根素；藥物預(yù)處理；缺血再灌注損傷；肝硬化；大鼠　　葛根素對肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷保護作用及其保護機制的研究孫鵬，李五生，張楠，周小娜，劉金龍【摘要】目的觀察葛根素（Pue）對肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷是否具有保護作用，及其保護機制。方法首先建立大鼠肝硬化動物模型，在此模型基礎(chǔ)上建立大鼠全肝缺血再灌注模型，比較用Pue預(yù)處理對缺血再灌注后，

3、肝組織光鏡下的形態(tài)學(xué)改變；血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和氧化亞氮（NO）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性，及肝組織中NO、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、MDA含量、SOD活性變化。結(jié)果Pue預(yù)處理可使大鼠血清NO含量、肝組織NO含量及SOD活性明顯增高；而血清ALT、AST、MDA含量及肝組織TNF-α、MDA含量明顯降低；肝組織形態(tài)損傷也有所減輕。結(jié)論葛根素對肝硬化大鼠肝缺血再灌注損傷有顯著的保護作用，其主要機制是減少NO的降低、擴張血管、改善微循環(huán)；清除氧自由基、減輕脂質(zhì)過氧化。【關(guān)鍵詞】葛根素；藥物預(yù)處理；缺血再灌注損傷；肝硬化；大鼠

4、現(xiàn)代肝膽外科中避免術(shù)中過多的出血，及時而有效地控制出血是手術(shù)成功的關(guān)鍵之一，阻斷肝血流技術(shù)在肝切除術(shù)中被廣泛應(yīng)用。許多肝臟疾病患者往往伴有肝硬化，其硬化肝臟對缺血的耐受性較差，長時間阻斷入肝血流或術(shù)中大出血均可引起I/R損傷而加重處于代償邊緣的肝臟負擔(dān)，導(dǎo)致術(shù)后發(fā)生肝功能衰竭的可能性增大。因此尋找一種對肝硬化肝臟缺血及再灌注具有保護作用的藥物及方法具有重要臨床意義。以往采用的缺血預(yù)處理的方法有其缺陷并在臨床應(yīng)用中受到限制，故尋找一種藥物預(yù)處理來保護肝組織、減輕I/R損傷具有重要的臨床價值。以往試驗證明葛根素對正常肝臟及其他多個組織器官的I/R損傷具有良好的保護作用。本次試驗通過葛根素預(yù)處理及缺

5、血預(yù)處理對肝硬化大鼠肝臟I/R損傷保護作用的對比，探討葛根素是否對肝硬化大鼠肝臟的I/R損傷具有保護作用，并進一步研究其作用機制。1材料與方法1.1動物DF-330型-70℃低溫冰箱、HH21-600型恒溫水浴箱、722分光光度計。CCl4，瀘州市鑫達化工有限公司提供，批號20050713；食用酒，瀘州市食品廠提供；葛根素注射液哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司提供，批號050102B；SOD測定試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，黃嘌呤氧化酶法測定，批號20050716；MDA測定試劑盒，南京建成生物工程研究所提供；TBA法測定，批號20050716；NO測定試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，亞硝酸鹽

6、法測定，批號20050719；TNF-α測定試劑盒，上海森雄科技實業(yè)有限公司，雙抗體夾心ABC-ELISA法測定，批號20050719。1.3模型制備及試驗方法1.3.1大鼠肝硬化模型制備經(jīng)大鼠腹部皮下注射CCl4大豆油溶液，前4次劑量為0.5ml/100g體重60%CCl4大豆油溶液，每隔3天1次，第4次后間隔7天注射第5次（可減少大鼠死亡率），第5次起劑量改為0.3ml/100g體重40%CCl4大豆油溶液，每隔3天1次，共13次；除注射CCl4當(dāng)日外，每日1次60%食用酒灌胃，乙醇劑量0.4g/100g體重；給予正常飲水；以高脂低蛋白飼料喂養(yǎng)。上述操作第6周末停止，繼續(xù)觀察至8周末大鼠肝

7、硬化模型制備成功并趨于穩(wěn)定。第2周起每周末行B超定位肝穿刺病理檢查，8周末挑選肝硬化程度趨于同一水平大鼠128只，繼續(xù)進行下面試驗。1.3.2動物分組按隨機數(shù)字表法，將128只大鼠隨機分為4組，每組再分為4個時間亞組，每亞組8只大鼠。4組分別為A組：假手術(shù)組；B組：單純?nèi)毖俟嘧⒔M；C組：缺血預(yù)處理組；D組：葛根素預(yù)處理組。4個時間亞組分別為a亞組：缺血前時間亞組；b亞組：缺血再灌注后1h時間亞組