仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

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1、仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)程子兵1　董春霞2石國界3沙里塔那4馬長麗1（1.塔城地區(qū)動物疾控與診斷中心　新疆塔城　834700；2.重慶市武隆縣畜牧獸醫(yī)局重慶市武隆縣408500；3.塔城市畜牧獸醫(yī)工作站新疆塔城834700；4.額敏縣獸醫(yī)工作站新疆額敏縣834600）摘要:對塔城地區(qū)一農(nóng)戶飼養(yǎng)豬群中仔豬發(fā)生的臨床癥狀以水腫病、白痢、黃痢為特征的病例進(jìn)行了樣品采集，后經(jīng)麥康凱、伊紅美藍(lán)分離培養(yǎng)，糖發(fā)酵生化試驗(yàn)、動物試驗(yàn)等結(jié)果顯示均為大腸桿菌，同時通過藥敏試驗(yàn)篩選出敏感抗生素。關(guān)鍵詞：仔豬；大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)Abstract：Specimenswithdropsyanddy

2、senteryclinicalsymptomswereisolatedfromonehouseholdraisespiggroupinTachengarea.Bybacteriaculture,biochemicaltestandanimaltest,theresultsindicatethebacteriumispathogenicEscherichiaColi.Meanwhile,weascertainsensitiveantibioticstothisEcolibymedicinetest.Keywords:pig;EscherichiaColi;isolateindentify;med

3、icinetest仔豬大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的腸道傳染病，主要表現(xiàn)為仔豬白痢、黃痢和水腫病，其中黃痢多發(fā)生于1周內(nèi)哺乳仔豬，病豬主要表現(xiàn)為排黃色糊狀糞便；白痢多發(fā)于10～30日齡，病豬主要表現(xiàn)為排乳白色或灰白色腥臭糊狀糞便；水腫病多發(fā)于斷奶仔豬，主要有神經(jīng)癥狀、胃壁、腸黏膜等組織水腫，四季均可發(fā)生，發(fā)病率和致死率高低不等，嚴(yán)重者同窩仔豬中發(fā)病率可達(dá)90％以上，致死率可達(dá)100％，幸存者則影響生長，甚至成為僵豬【l】。由于致病性大腸桿菌的血清型復(fù)雜，在不同豬場、不同季節(jié)、不同批次，不同年齡流行菌株均可能不相同，造成規(guī)?；i場的防控困難，引起較大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。筆者對塔城地區(qū)農(nóng)戶散養(yǎng)豬群中采

4、集的仔豬白痢、黃痢和仔豬水腫病的病料進(jìn)行了細(xì)菌分離培養(yǎng)、鑒定及藥敏試驗(yàn)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：1材料與方法1．1材料1.1.1采取農(nóng)民散養(yǎng)戶中臨床癥狀較為典型的5份仔豬白痢、黃痢肛門拭子及仔豬水腫病的小腸黏膜2份。1.1.2培養(yǎng)劑、普通肉湯、血清瓊脂平板由本實(shí)驗(yàn)室自行配制，麥康凱瓊脂（MCK）、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）按參考文獻(xiàn)[3]制備；三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸櫞酸鹽瓊脂斜面、葡萄糖微量生化反應(yīng)管、乳糖微量生化反應(yīng)管、麥芽糖微量生化反應(yīng)管、甘露醇微量生化反應(yīng)管購自杭州微生物試劑有限公司，10種藥敏試紙購自北京天壇生物技術(shù)有限公司。1.1.3實(shí)驗(yàn)動物12

5、只小白鼠。1.1.4藥敏試驗(yàn)抗生素藥敏紙片青霉素（PG）、丁胺卡那霉素（AKN）、頭孢噻肟（CTX）、復(fù)合磺胺（SXT）、慶大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、苯唑青霉素（OXA）、頭孢唑啉（CFZ）、頭孢三嗪（CRO）、氟派酸（NOR）。1.2方法1.2.1細(xì)菌分離培養(yǎng)與鏡檢將待檢樣品接種于普通肉湯進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，置37℃溫箱培養(yǎng)12～16h觀察結(jié)果；然后將培養(yǎng)物分別劃線接種于麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，37℃溫箱培養(yǎng)20-24h后挑取平板上可疑菌落抹片革蘭氏染色鏡檢。1.2.2生化試驗(yàn)生化鑒定挑取經(jīng)純培養(yǎng)的菌落分別接種于三糖鐵瓊脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸櫞

6、酸鹽瓊脂斜面和葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇等發(fā)酵管，37℃培養(yǎng)24h。1.2.3致病性試驗(yàn)將分離菌的肉湯純培養(yǎng)物對10只健康小白鼠分別腹腔注射0.4～0.5mL，另2只小白鼠腹腔注射0.4～0.5mL無菌肉湯培養(yǎng)液作為對照，24～48h死亡或發(fā)病者取肝臟抹片革蘭氏染色鏡檢。1.2.4藥敏試驗(yàn)采用藥敏紙片擴(kuò)散法[4],37℃培養(yǎng)18～24h后觀察結(jié)果并測量抑菌圈。2結(jié)果2.1分離培養(yǎng)疑似培養(yǎng)物在麥康凱瓊脂培養(yǎng)20h后均為紅色菌落，在伊紅美藍(lán)瓊脂上培養(yǎng)20h后為中心暗藍(lán)黑色并有綠色金屬閃光的菌落；革蘭氏染色鏡檢均為革蘭氏陰性中等大小桿菌。2.2生化反應(yīng)從7份樣品中分離的細(xì)菌經(jīng)生化鑒定后，確定均為大

7、腸埃希氏菌，具體結(jié)果見表1：表1：大腸桿菌生化鑒定結(jié)果試驗(yàn)TSTH2SIdoleMRV-P麥芽糖枸櫞酸鹽甘露醇葡萄糖乳糖結(jié)果＋－＋＋－＋－＋＋＋2.3致病性結(jié)果將分離菌的肉湯純培養(yǎng)物對12只健康小白鼠分別腹腔注射0.4～0.5mL，另2只小白鼠為對照，24～36h內(nèi)死亡6只,48h后死亡2只,另2只發(fā)病,對照鼠不發(fā)病。取發(fā)病者肝臟抹片革蘭氏染色鏡檢，結(jié)果均為革蘭氏陰性中等大小桿菌。2.4藥敏試驗(yàn)藥