重慶市腹瀉仔豬大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗研究

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1、重慶市腹瀉仔豬大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗研究張素輝，曹國文，付利芝,徐登峰，周淑蘭,王孝友(重慶市畜牧科學院榮昌402460)摘要：從重慶多個規(guī)模豬場采集34份腹瀉仔豬糞便樣品進行細菌的分離，通過形態(tài)學檢查、生化鑒定分離到的32株犬腸桿菌，并對分離的人腸桿菌菌株進行藥物敏感試驗，結(jié)果顯示,氨節(jié)青/舒巴坦、菌必治、先鋒必、先鋒必索等為其敏感藥物。關(guān)鍵詞：腹瀉仔豬；大腸桿菌；分離；鑒定；藥敏試驗隨著養(yǎng)豬業(yè)規(guī)?；⒓s化發(fā)展，仔豬細菌性腹瀉疾病發(fā)病率越來越高，危害也越來越嚴重。據(jù)資料統(tǒng)計，我國仔豬死亡率一般波動在15-25%之間，

2、2周齡以內(nèi)死亡率為26%,2-4周齡的死亡率為16%,斷奶前后因腹瀉死亡占總死亡的49.I1%1'1,其中70%的死亡被認為是大腸桿菌的作用［21。仔獵大腸桿菌病是山致病性大腸桿菌引起的-種急性腸道傳染病，常見的有仔豬黃痢、仔豬白痢。該病在我國許多地區(qū)的豬場都有發(fā)生，是危害仔豬的重要傳染病Z-o隨著集約化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，致病性大腸桿菌造成的損失H益明顯，已經(jīng)引起了廣泛重視。筆者對重慶肚部分豬場腹瀉仔豬進行調(diào)查，從流行病學及臨床癥狀分析疑為大腸桿菌引起。從所分離菌株在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上長出紅色菌落、顯微鏡鏡檢以及所做的生化試驗結(jié)

3、果證明所分離出的細菌為大腸桿菌。日前，防治仔豬大腸桿菌感染杵?腹瀉的較有效『段仍是應(yīng)用抗牛素，但動物長期服用大量濫用抗菌藥物，易破壞腸道正常菌?群，增加感染性，造成反復感染和繼發(fā)感染，同時易造成細菌耐藥性的增加，因此，針對臨床分離的人腸桿菌病原菌進行藥敏試驗，而指導臨床用藥具有重要意義。1.材料：病料：腹瀉仔豬糞便，采自重慶多個規(guī)?；i場。培養(yǎng)基及試劑：麥康凱培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、腸桿菌科細菌微量生化鑒定管，購自杭州微生物試劑有限公司。一藥敏紙片：頭抱卩坐I麻、菌必治、先鋒必、新霉素、氛

4、派酸、丙氛派酸、磺胺甲基異嗯醴、復方新諾明、頭葩氨陸肪、恩諾沙星、阿奇每索、阿莫西林等12種抗生索，購自杭州微生物試劑有限公司。作者簡介：張素輝(1980-),女，碩士，實習研究員。從事動物微生態(tài)制劑與新曽紗的研究。2.方法:2.1大腸桿菌的分離培養(yǎng)川火菌普通肉湯洗滌沾有腹瀉仔豬糞便的火菌棉拭子，接種于麥康凱培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24h,鼎馭粉紅色的單個菌落，分別劃線接種于普通培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基進行純培養(yǎng);取純培養(yǎng)菌接種于普通瓊脂斜面，37°C培養(yǎng)20h,4°C保存?zhèn)浯ā?.2分離菌形態(tài)觀察挑取麥康凱培養(yǎng)基上生長的紅色菌落

5、、伊紅美藍平板上的暗黑色帶金屬光澤的菌落,涂片進行革蘭氏染色，光學顯微鏡鏡檢觀察分離菌株的染色及形態(tài)特點。2.3分離菌?；囼瀸毦M行糖發(fā)酵試驗、甲基紅試驗、VP試驗、眄

6、口朵試驗、硫化氫試驗、尿素酶試驗、枸椽酸鹽利川試驗。2.4分離菌藥敏試驗各選取分離自每個豬場的大腸桿菌代表株兩株（共10株）進行藥物敏感性試驗，編號分別為：4586、4591、5677、5679、4667、4671、4518、4526、4571、4656。用滅菌棉拭子蘸取分離菌的肉湯培養(yǎng)物，均勻涂布接種于普通瓊脂培養(yǎng)基，待稍干后，用無菌銀子將各種藥敏紙片

7、分別平貼于培養(yǎng)基表仙37°C培養(yǎng)12?18h后，測定抑菌環(huán)的大小。判定標準：抑菌環(huán)一育徑在15mm以上為高度敏感；10?15mm為中度敏感；10mm以下為低度敏感，無抑菌環(huán)為耐藥。3.結(jié)果3.1細菌在培養(yǎng)基上菌落及革蘭氏染色鏡檢特征腹瀉仔豬糞樣接種于麥康凱培養(yǎng)基，于37°C培養(yǎng)24h后形成紅色、惻形、光滑、濕潤、中央隆起、中等大小的菌落。伊紅美藍培養(yǎng)基37°C培養(yǎng)24h形成圜形、邊緣整齊、暗黑色帶金屬光澤的菌落；普通培養(yǎng)基上37°C培養(yǎng)24h后得到純培養(yǎng)菌，菌落呈惻形、濕潤、降起、半透明的近無色菌落。取單個菌落接種于普通肉湯

8、中可觀察到肉湯變混濁，底部有絮狀物沉淀。染色鏡檢特征：革蘭氏陰性，兩端鈍圓的中等大小桿菌。3.2?；囼灲Y(jié)果對所令可疑菌株進行生化試驗，各菌株均能發(fā)酵匍萄糖、麥芽糖、乳糖、廿露醇、山梨醇產(chǎn)酸，多數(shù)能產(chǎn)氣，MR試驗為陽性，VP試驗為陰性，硫化氫試驗、尿素酶試驗均為陰性,不能利用枸椽酸鹽，參見伯杰氏細菌鑒定手冊，試驗結(jié)果與大腸桿菌相應(yīng)的?；匦砸恢?將分離的32株菌判定為人腸桿菌。3.3藥敏試驗結(jié)杲藥物敏感性試驗結(jié)果見表1。表1顯示，筆者在重慶市2007年分離的人腸桿菌對菌必治、先鋒必、氟派酸、頭砲氨噬衍、恩諾沙星等高度敏感；對

9、卡那霉素，新霉素、壞丙沙星中敏,對頭他呻唯、阿奇霉索等中度敏感；對新霉素、復方新諾明、阿莫西林不敏感。農(nóng)112種抗菌索藥敏紙片對10株大腸桿菌分離菌的抑菌圈直徑（單位:儷）Tablet.Thebacteriostasis-diameteroftheBacteriophage-sliptot