仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

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1、仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)程子兵1 董春霞2石國(guó)界3沙里塔那4馬長(zhǎng)麗1(1.塔城地區(qū)動(dòng)物疾控與診斷中心 新疆塔城 834700;2.重慶市武隆縣畜牧獸醫(yī)局重慶市武隆縣408500;3.塔城市畜牧獸醫(yī)工作站新疆塔城834700;4.額敏縣獸醫(yī)工作站新疆額敏縣834600)摘要:對(duì)塔城地區(qū)一農(nóng)戶(hù)飼養(yǎng)豬群中仔豬發(fā)生的臨床癥狀以水腫病、白痢、黃痢為特征的病例進(jìn)行了樣品采集,后經(jīng)麥康凱、伊紅美藍(lán)分離培養(yǎng),糖發(fā)酵生化試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)等結(jié)果顯示均為大腸桿菌,同時(shí)通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選出敏感抗生素。關(guān)鍵詞:仔豬;大腸桿菌;分離鑒定;藥敏試驗(yàn)Abstract:Specimenswithdropsyanddy

2、senteryclinicalsymptomswereisolatedfromonehouseholdraisespiggroupinTachengarea.Bybacteriaculture,biochemicaltestandanimaltest,theresultsindicatethebacteriumispathogenicEscherichiaColi.Meanwhile,weascertainsensitiveantibioticstothisEcolibymedicinetest.Keywords:pig;EscherichiaColi;isolateindentify;med

3、icinetest仔豬大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的腸道傳染病,主要表現(xiàn)為仔豬白痢、黃痢和水腫病,其中黃痢多發(fā)生于1周內(nèi)哺乳仔豬,病豬主要表現(xiàn)為排黃色糊狀糞便;白痢多發(fā)于10~30日齡,病豬主要表現(xiàn)為排乳白色或灰白色腥臭糊狀糞便;水腫病多發(fā)于斷奶仔豬,主要有神經(jīng)癥狀、胃壁、腸黏膜等組織水腫,四季均可發(fā)生,發(fā)病率和致死率高低不等,嚴(yán)重者同窩仔豬中發(fā)病率可達(dá)90%以上,致死率可達(dá)100%,幸存者則影響生長(zhǎng),甚至成為僵豬【l】。由于致病性大腸桿菌的血清型復(fù)雜,在不同豬場(chǎng)、不同季節(jié)、不同批次,不同年齡流行菌株均可能不相同,造成規(guī)模化豬場(chǎng)的防控困難,引起較大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。筆者對(duì)塔城地區(qū)農(nóng)戶(hù)散養(yǎng)豬群中采

4、集的仔豬白痢、黃痢和仔豬水腫病的病料進(jìn)行了細(xì)菌分離培養(yǎng)、鑒定及藥敏試驗(yàn)?,F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下:1材料與方法1.1材料1.1.1采取農(nóng)民散養(yǎng)戶(hù)中臨床癥狀較為典型的5份仔豬白痢、黃痢肛門(mén)拭子及仔豬水腫病的小腸黏膜2份。1.1.2培養(yǎng)劑、普通肉湯、血清瓊脂平板由本實(shí)驗(yàn)室自行配制,麥康凱瓊脂(MCK)、伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)按參考文獻(xiàn)[3]制備;三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸櫞酸鹽瓊脂斜面、葡萄糖微量生化反應(yīng)管、乳糖微量生化反應(yīng)管、麥芽糖微量生化反應(yīng)管、甘露醇微量生化反應(yīng)管購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司,10種藥敏試紙購(gòu)自北京天壇生物技術(shù)有限公司。1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12

5、只小白鼠。1.1.4藥敏試驗(yàn)抗生素藥敏紙片青霉素(PG)、丁胺卡那霉素(AKN)、頭孢噻肟(CTX)、復(fù)合磺胺(SXT)、慶大霉素(GEN)、妥布霉(TOB)、苯唑青霉素(OXA)、頭孢唑啉(CFZ)、頭孢三嗪(CRO)、氟派酸(NOR)。1.2方法1.2.1細(xì)菌分離培養(yǎng)與鏡檢將待檢樣品接種于普通肉湯進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),置37℃溫箱培養(yǎng)12~16h觀察結(jié)果;然后將培養(yǎng)物分別劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),37℃溫箱培養(yǎng)20-24h后挑取平板上可疑菌落抹片革蘭氏染色鏡檢。1.2.2生化試驗(yàn)生化鑒定挑取經(jīng)純培養(yǎng)的菌落分別接種于三糖鐵瓊脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸櫞

6、酸鹽瓊脂斜面和葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇等發(fā)酵管,37℃培養(yǎng)24h。1.2.3致病性試驗(yàn)將分離菌的肉湯純培養(yǎng)物對(duì)10只健康小白鼠分別腹腔注射0.4~0.5mL,另2只小白鼠腹腔注射0.4~0.5mL無(wú)菌肉湯培養(yǎng)液作為對(duì)照,24~48h死亡或發(fā)病者取肝臟抹片革蘭氏染色鏡檢。1.2.4藥敏試驗(yàn)采用藥敏紙片擴(kuò)散法[4],37℃培養(yǎng)18~24h后觀察結(jié)果并測(cè)量抑菌圈。2結(jié)果2.1分離培養(yǎng)疑似培養(yǎng)物在麥康凱瓊脂培養(yǎng)20h后均為紅色菌落,在伊紅美藍(lán)瓊脂上培養(yǎng)20h后為中心暗藍(lán)黑色并有綠色金屬閃光的菌落;革蘭氏染色鏡檢均為革蘭氏陰性中等大小桿菌。2.2生化反應(yīng)從7份樣品中分離的細(xì)菌經(jīng)生化鑒定后,確定均為大

7、腸埃希氏菌,具體結(jié)果見(jiàn)表1:表1:大腸桿菌生化鑒定結(jié)果試驗(yàn)TSTH2SIdoleMRV-P麥芽糖枸櫞酸鹽甘露醇葡萄糖乳糖結(jié)果+-++-+-+++2.3致病性結(jié)果將分離菌的肉湯純培養(yǎng)物對(duì)12只健康小白鼠分別腹腔注射0.4~0.5mL,另2只小白鼠為對(duì)照,24~36h內(nèi)死亡6只,48h后死亡2只,另2只發(fā)病,對(duì)照鼠不發(fā)病。取發(fā)病者肝臟抹片革蘭氏染色鏡檢,結(jié)果均為革蘭氏陰性中等大小桿菌。2.4藥敏試驗(yàn)藥

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