大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的研究

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1、大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的研究李煜，王振飛，李瑤，戴寶貞，賈瑞貞，楊利軍，黃翔華【摘要】　　目的研究大薊提取液對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。方法細(xì)胞形態(tài)觀察和活細(xì)胞計(jì)數(shù)法研究大薊提取液對(duì)人白血病細(xì)胞K562，肝癌細(xì)胞HepG2，宮頸癌細(xì)胞Hela，胃癌細(xì)胞BGC823生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果大薊提取液可使4種癌細(xì)胞形態(tài)上發(fā)生皺縮、變圓、脫壁、碎裂等變化，生長(zhǎng)受到明顯抑制，抑制率最高可達(dá)92.34%。結(jié)論大薊有確切的抑癌作用，并與中醫(yī)的氣血理論、藥物歸經(jīng)理論和肝腎同源理論相一致，在體外細(xì)胞水平上也有良好體現(xiàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室手段研究中醫(yī)藥同樣有著重要指導(dǎo)意

2、義?！娟P(guān)鍵詞】大薊癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectsoftheextractfromCirsiumjaponicumFisch.DCtheongroancarcinomacells.MethodsMorphologicalchangeobservationandlivecellaccountingjaponicumFisch.DConhumanchronicmyloidleukemiaK562cell,hepatomaHepG2cell,cervicalca

3、rcinomaHelacellandgastriccarcinomaBGC823cell.ResultsGroCirsiumjaponicumFisch.DC，thehighestinhibitoryrateorphologicalchangesincludedshrinkage,roundness,floatingandcrumbling.ConclusionCirsiumjaponicumFisch.DChasreliablecarcinoma-inhibitingeffectsandtheeffectsconformtotheqiandbl

4、oodtheory,theMeridian-reachingtheoryandtheliver-kidneyhomologytheoryoftraditionalChinesemedicine,edicineportantguidancemeaningtoChinesetraditionalmedicineresearchbylaboratorymethods.　　KeyjaponicumFisch.DC;Carcinomacell;Groin，紗布過濾，濾渣加適量六蒸水置110℃高壓蒸氣鍋內(nèi)20min，紗布過濾；合并兩次濾液，2℃冰箱中靜置72

5、h，高、中、低速濾紙，0.45μm，0.22μm微孔濾膜逐級(jí)過濾；濾液蒸發(fā)濃縮、滅菌、4℃保存，使用時(shí)以培養(yǎng)液稀釋至所需質(zhì)量分?jǐn)?shù)（以生藥計(jì)算）。　　1.2器材與試劑　　倒置相差顯微鏡（NikoneclipseTE2000-U），超凈臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），CO2培養(yǎng)箱（GALAXYBINDER），24孔培養(yǎng)板（BIOFIL），RPMI1640、高糖DMEM（GIBCO），胎牛血清（TBD）?！　?.3癌細(xì)胞系　　人白血病細(xì)胞系K562，肝癌細(xì)胞系HepG2，胃癌細(xì)胞系BGC823，宮頸癌細(xì)胞系Hela（均由本實(shí)驗(yàn)室傳代保種），均常規(guī)傳代培養(yǎng)。

6、　　2方法　　2.1分組每種細(xì)胞均設(shè)對(duì)照組（不加藥）與觀察組（加藥），觀察組分設(shè)高（12mg/ml）中（6mg/ml）、低（2mg/ml）3個(gè)劑量組?！　?.2加藥處理取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的4種癌細(xì)胞，均以2×104/孔接種于24孔培養(yǎng)板，接種24h后加藥。加藥后：①每天于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化；②每隔24h各組均取5孔細(xì)胞臺(tái)朌藍(lán)拒染法計(jì)活細(xì)胞數(shù)，每孔計(jì)3次，5孔取平均值，計(jì)算出當(dāng)天的生長(zhǎng)抑制率，抑制率（%）=〔（對(duì)照組平均活細(xì)胞數(shù)-觀察組平均活細(xì)胞數(shù)）/對(duì)照組平均活細(xì)胞數(shù)〕×100%〔1〕，連續(xù)6d?！　?.3抑制效果的判斷與分析①細(xì)胞形態(tài)的

7、觀察與分析；②平均抑制率：6d的抑制率相加取平均值；③最高抑制率：每種細(xì)胞各劑量組取其6d中最高的1d。抑制率的比較采用χ2檢驗(yàn)。　　3結(jié)果　　3.1大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞形態(tài)的影響對(duì)照組：K562（圖1）大小均勻，胞體圓整，折光性好，日益密集；HepG2（圖2）、Hela（圖3）和BGC823（圖4）緊貼板壁，胞間緊密接觸，胞質(zhì)透亮，可見分裂相，連續(xù)觀察，細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)，集落不斷擴(kuò)大。觀察組：加藥后8h，K562多數(shù)大小不均，胞膜內(nèi)陷或出泡；HepG2、Hela和BGC823部分胞體回縮，胞質(zhì)內(nèi)有顆粒物積累。加藥后24h，K562（圖5）大部分形

8、態(tài)異常，或皺縮或內(nèi)容物釋放形成“鬼影”，板底可見碎渣樣物質(zhì)；HepG2（圖6）、Hela（圖7）和BGC823（圖8）部分皺縮、變圓、脫