農(nóng)桿菌介導(dǎo)玉米遺傳轉(zhuǎn)化影響因子的研究

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1、分子植物育種,2006年,第4卷,第2期,第228-232頁(yè)MolecularPlantBreeding,2006,Vol.4,No.2,228-232研究報(bào)告ResearchReport農(nóng)桿菌介導(dǎo)玉米遺傳轉(zhuǎn)化影響因子的研究袁鷹1李啟云1郝文媛1譚化1孔祥梅1張光弟2劉德璞11吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心,公主嶺,136100;2吉林省梨樹(shù)縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站,四平,136500通訊作者,liudp@cjaas.com摘要以東北春玉米自交系7922、340、78599、921及美國(guó)雜交種H99等幼胚愈傷組織為受體,利用農(nóng)桿

2、菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化Bt(CryIA.)基因,研究菌液預(yù)處理、愈傷組織狀態(tài)、侵染培養(yǎng)基、侵染時(shí)間及共培養(yǎng)條件等因素對(duì)轉(zhuǎn)化頻率的影響。根據(jù)轉(zhuǎn)化愈傷組織的除草劑(Basta)抗性篩選結(jié)果評(píng)估轉(zhuǎn)化率,表明繼代培養(yǎng)3~5d的愈傷組織適于轉(zhuǎn)化,其中以繼代5d的7922愈傷組織轉(zhuǎn)化率最高,為46.6%;不同基因型對(duì)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化率存在差異,H99的抗性愈傷組織率為34.57%,7922為26.27%、340為21.36%、78599和921抗性愈傷組織率僅為8.02%和6.78%?;蛐烷g差異顯著;浸染培養(yǎng)基中加入(AS100~200mg/L)抗

3、性愈傷轉(zhuǎn)化率明顯提高;菌液濃度OD6000.5~0.6、侵染時(shí)間5~10min、共培養(yǎng)時(shí)間3d最佳。關(guān)鍵詞農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,轉(zhuǎn)化頻率,影響因素,抗性愈傷組織StudiesonInfluencingFactorsofAgrobacteriumtumefaciensMediatedMaizeTransformationYuanYing1LiQiyun1HaoWenyuan1TanHua1KongXiangmei1ZhangGuangdi2LiuDepu11JilinAcademyofAgriculturalSciences,Gon

4、gzhuling,136100;2AgricultureGeneralizeStationofLishuCounty,Siping,136500Correspondingauthor,liudp@cjaas.comAbstractMaizeinbredlinesinNortheast(7922、340、78599etc.)immatureembryoscalliweretransformedbyAgrobacteriumtumefaciens(CryIABt.)inthisreport.Factorsinfluencing

5、transformationefficiencywerestudied,includingpre-treatment,callusstate,infectionmedium,infectiontimeandco-cultivationetal..Resultsshowedthatcallussubculturefor3~5dayswassuitablefortransformationandthattransformationefficiencyof7922callusreachedthehighestof46.6%aft

6、er5dayssubculture.DominantdifferenceexistedamongdifferentmaizegenotypeoninfectionsensitivityandH99wasthemostsensitivegenotypewith34.57%resistantcallus.Transformationeffi-ciencywasimprovedobviouslywithacetosyringone(AS)(100~200mg/L)appendedinmedium.Inaddition,bac-t

7、eriumconcentration(OD6000.5~0.6),5~10minutesinfectiontimeandco-culture3daysweretheoptimalcondi-tionsforAgrobacteriumtumefaciensmediatedmaizetransformation.KeywordsAgrobacteriumtumefaciensmediatedtransformation,Transformationefficiency,Influencingfactors,Resistantc

8、alli玉米是重要的糧食、飼料,又是制藥、淀粉、糖漿、油料、酒精工業(yè)的主要原料。中國(guó)是世界上第二大玉米生產(chǎn)國(guó),玉米在我國(guó)經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)中占有非常重要的地位。在玉米生產(chǎn)上,蟲(chóng)害是導(dǎo)致玉米減產(chǎn)的重要危害之一。玉米螟是我國(guó)大部分主產(chǎn)區(qū)的主要玉米害蟲(chóng),因而我國(guó)玉米害蟲(chóng)的綜合防治研究基本上是圍繞玉米螟展開(kāi)的。玉米螟的防

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