資源描述：
《青菜離體再生和農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化影響因子的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文青菜離體再生和農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化影響因子的研究姓名：范正琪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物物理學(xué)指導(dǎo)教師：崔海瑞2002.5.1中文摘要本文研究了青菜的再生體系和農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化幾種重要因子的影響，并首次探討了輻射處理對(duì)青菜再生和遺傳轉(zhuǎn)化的影響。為建立青菜的高頻再生體系，對(duì)影響青菜再生的因素進(jìn)行了分析。在青菜的離體培養(yǎng)過(guò)程中，外源激素對(duì)再生有著至關(guān)重要的作用。在所用的15種激素組合中，MS培養(yǎng)基中附加5mg／L6-BA和O．5mgrcNAA可以使再生頻率達(dá)到最高。在培養(yǎng)基中添加AgN03對(duì)子葉離體再生具有明顯的促進(jìn)作
2、用，5～7．5mg／L的AgN03可以顯著提高再生頻率。不同苗齡的外植體其再生頻率存在很大的差異，而且隨基因型的不同而變化。最適苗齡一般在無(wú)菌苗培養(yǎng)3～6天，矮抗青為3天，上海青為4天，蘇卅1青為6天。對(duì)子葉、子葉柄、帶柄的子葉、下胚軸四種外植體的再生能力進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)帶柄的子葉再生頻率最高，可作為建立青菜再生體系的適宜外植體?；蛐蛯?duì)再生也有重要的影響，不同基因型的再生能力有很大差異。在所用的5個(gè)青菜品種中，以香港菜心的再生頻率最高，為78％，其它依次為蘇州青、矮抗青、上海青、高樺白菜。il為了能有效地殺除共培養(yǎng)后殘余的農(nóng)桿菌
3、和篩選轉(zhuǎn)化體，測(cè)定了青菜對(duì)5種抗生素的敏感性。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，離體培養(yǎng)的子葉對(duì)潮霉素的敏感性大于卡那霉素。因此，在青菜的遺傳轉(zhuǎn)化中應(yīng)使用潮霉素作為篩選轉(zhuǎn)化體，濃度以25mg／L為宜。在所用的羧芐青霉素、氨芐青霉素、頭孢霉素三種抑菌抗生素中。根據(jù)它們對(duì)芽再生的影響，應(yīng)首選羧芐青霉素。為建立農(nóng)桿菌介導(dǎo)青菜轉(zhuǎn)化的穩(wěn)定體系，以gus基因瞬時(shí)表達(dá)頻率為指標(biāo)，對(duì)影響轉(zhuǎn)化頻率的幾個(gè)重要因子進(jìn)行了優(yōu)化。}通過(guò)對(duì)菌液濃度、感染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間的梯度實(shí)驗(yàn)得出，菌液濃度為OD600=O．5、＼感染10～15分鐘、共培養(yǎng)5天時(shí)，gus瞬時(shí)表達(dá)頻率達(dá)到最高。不
4、同的農(nóng)桿菌其轉(zhuǎn)化效果不同，在所用的2個(gè)農(nóng)桿菌菌株中，用EHAl05轉(zhuǎn)化時(shí)，gus瞬時(shí)表達(dá)頻率高于LBA4404。同一菌株與不同的質(zhì)粒綴合，其轉(zhuǎn)化頻率也有差異，在菌株EHAl05與3種質(zhì)粒pKUB、pKUC和pKSB的組合中，以EHAl05(pKUC)的轉(zhuǎn)化頻率最高?；蛐蛯?duì)轉(zhuǎn)化頻率也有重要的影響，在所用的5個(gè)青菜品種中，以高樺白菜的gus瞬時(shí)表達(dá)頻率最高，為54％，其它依次為上海青、蘇州青、矮抗青、香港菜心。／Ill本文還研究了Y射線輻射處理對(duì)青菜離體再生和轉(zhuǎn)化的影響。在再生試驗(yàn)時(shí)，分別采用了T射線處理外植體的供體——無(wú)菌苗和培養(yǎng)
5、中的外植體。發(fā)現(xiàn)用1～5Gv的劑量處理外植體能明顯促進(jìn)不定芽的再生。在轉(zhuǎn)化時(shí)，分別對(duì)在感染前和感染后對(duì)外植體進(jìn)行了輻射處理。結(jié)果表明在感染后用低劑量處理有助于gus瞬時(shí)表達(dá)的提高。這一結(jié)果證明，在進(jìn)行青菜的組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化時(shí)，輔以低劑量的Y射線處理，可以提高再生和轉(zhuǎn)化頻率。關(guān)鍵詞：青菜；再生：農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化；輻射／AbstractTheregenerationsystemandeffectsofkeyfactorsontransformationmediatedbyAgrobacteriuminChinesecabbage(Bras
6、sicacampestrisSSpchinensis上)werestudied，andalsotheeffectsofirradiationontheregenerationandtransformationwereexploredinthisthesis．SomefactorsshowingeffectsonregenerationweretestedforestablishmentoftheregenerationsysteminChinesecabbage．Intheprocessofinvitroculture，hormo
7、nesplayedanimportantrole．Among15combinationsofdifferentconcentrationof6-BAwithNAA，thecombinationof5mg／LBAand0．5mg／LNAAshowedthehighestrateofshootregeneration．AgN03showedobviouseffectspromptingshootregenerationandanadditionof5-75mg，Linthemediumcouldsignificantlyincreas
8、eregenerationfrequency．ExplantsfromdifferenttimeofculturedseedlingsshowedgreatdifferenceinregenerationrateThesuitableseedlin
