農(nóng)桿菌介導玉米遺傳轉化影響因子的研究

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資源描述:

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1、分子植物育種,2006年,第4卷,第2期,第228-232頁MolecularPlantBreeding,2006,Vol.4,No.2,228-232研究報告ResearchReport農(nóng)桿菌介導玉米遺傳轉化影響因子的研究袁鷹1李啟云1郝文媛1譚化1孔祥梅1張光弟2劉德璞11吉林省農(nóng)業(yè)科學院生物技術研究中心,公主嶺,136100;2吉林省梨樹縣農(nóng)業(yè)技術推廣站,四平,136500通訊作者,liudp@cjaas.com摘要以東北春玉米自交系7922、340、78599、921及美國雜交種H99等幼胚愈傷組織為受體,利用農(nóng)桿

2、菌介導法轉化Bt(CryIA.)基因,研究菌液預處理、愈傷組織狀態(tài)、侵染培養(yǎng)基、侵染時間及共培養(yǎng)條件等因素對轉化頻率的影響。根據(jù)轉化愈傷組織的除草劑(Basta)抗性篩選結果評估轉化率,表明繼代培養(yǎng)3~5d的愈傷組織適于轉化,其中以繼代5d的7922愈傷組織轉化率最高,為46.6%;不同基因型對農(nóng)桿菌轉化率存在差異,H99的抗性愈傷組織率為34.57%,7922為26.27%、340為21.36%、78599和921抗性愈傷組織率僅為8.02%和6.78%。基因型間差異顯著;浸染培養(yǎng)基中加入(AS100~200mg/L)抗

3、性愈傷轉化率明顯提高;菌液濃度OD6000.5~0.6、侵染時間5~10min、共培養(yǎng)時間3d最佳。關鍵詞農(nóng)桿菌介導法,轉化頻率,影響因素,抗性愈傷組織StudiesonInfluencingFactorsofAgrobacteriumtumefaciensMediatedMaizeTransformationYuanYing1LiQiyun1HaoWenyuan1TanHua1KongXiangmei1ZhangGuangdi2LiuDepu11JilinAcademyofAgriculturalSciences,Gon

4、gzhuling,136100;2AgricultureGeneralizeStationofLishuCounty,Siping,136500Correspondingauthor,liudp@cjaas.comAbstractMaizeinbredlinesinNortheast(7922、340、78599etc.)immatureembryoscalliweretransformedbyAgrobacteriumtumefaciens(CryIABt.)inthisreport.Factorsinfluencing

5、transformationefficiencywerestudied,includingpre-treatment,callusstate,infectionmedium,infectiontimeandco-cultivationetal..Resultsshowedthatcallussubculturefor3~5dayswassuitablefortransformationandthattransformationefficiencyof7922callusreachedthehighestof46.6%aft

6、er5dayssubculture.DominantdifferenceexistedamongdifferentmaizegenotypeoninfectionsensitivityandH99wasthemostsensitivegenotypewith34.57%resistantcallus.Transformationeffi-ciencywasimprovedobviouslywithacetosyringone(AS)(100~200mg/L)appendedinmedium.Inaddition,bac-t

7、eriumconcentration(OD6000.5~0.6),5~10minutesinfectiontimeandco-culture3daysweretheoptimalcondi-tionsforAgrobacteriumtumefaciensmediatedmaizetransformation.KeywordsAgrobacteriumtumefaciensmediatedtransformation,Transformationefficiency,Influencingfactors,Resistantc

8、alli玉米是重要的糧食、飼料,又是制藥、淀粉、糖漿、油料、酒精工業(yè)的主要原料。中國是世界上第二大玉米生產(chǎn)國,玉米在我國經(jīng)濟生產(chǎn)中占有非常重要的地位。在玉米生產(chǎn)上,蟲害是導致玉米減產(chǎn)的重要危害之一。玉米螟是我國大部分主產(chǎn)區(qū)的主要玉米害蟲,因而我國玉米害蟲的綜合防治研究基本上是圍繞玉米螟展開的。玉米螟的防

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