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《醫(yī)學(xué)畢業(yè)論文細(xì)胞膜表達(dá)的hlag誘導(dǎo)免疫耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞的產(chǎn)生》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、XX大學(xué)畢業(yè)論文細(xì)胞膜表達(dá)的HLAG誘導(dǎo)免疫耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞的產(chǎn)生姓名：2014年6月25日作者：周浩黎緯明張敏劉崢喋鄒萍【摘要】為了探討體外誘導(dǎo)免疫耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)產(chǎn)生的方法及其機(jī)制，利用人HLAG1真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞并與DC共培養(yǎng)后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表面CD80、CD86、ILT3和ILT4分子表達(dá)情況,同時(shí)采用氟胸腺密定核昔(3HTdR)摻入法檢測(cè)DC對(duì)T細(xì)胞功能的影響。結(jié)果表明，膜表達(dá)的HLAG1分子與樹(shù)突狀細(xì)胞作用后，DC表而免疫共刺激分子CD80、CD86表達(dá)下調(diào)，而抑制性分子I
2、LT3、ILT4表達(dá)上調(diào)。HLAG1作用后DC異基因抗原誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖的活性明顯下降。結(jié)論：HLAG1分子可以在體外條件下，下調(diào)DC表面免疫共刺激分子水平，促進(jìn)ILT3、ILT4表達(dá),誘導(dǎo)免疫耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞產(chǎn)生。【關(guān)鍵詞】樹(shù)突狀細(xì)胞；HLAG；T淋巴細(xì)胞；免疫耐受InductionofTolerogenicDendriticCellsbyMembraneBoundHLAGAbstractInordertostudyhowtoinducetolerogenicdendriticcellsinvitroanditsmechanism,the
3、K562cellstransducedwithHLAGconstructwereusedtococulturewithDC.Thentheirrelatedimmunologicalchanges,suchasmembranemoleculesCD80,CD86,ILT3andILT4expressionlevelsweredetectedbyflowcytometry.Allogeneicproliferationofperipheralbloodmononuclearcells(PBMNC)wasdetectedbymixedlymph
4、ocytereaction.TheresultsshowedthatCD80andCD86expressionsonDCweredownregulated,whileILT3andILT4expressionswereupregulatedaftercoculturingwithK562HLAGcells.TheDCswerelessabletostimulatetheallogenicPBMNC.ItisconcludedthatthemembraneboundHLAGcanupregulateexpressionofinhibitory
5、receptorsILT3andILT4,inducingtolerogenicDCinvitro,whichmayprovideanovelstrategyfortransplanttoleranceinduction.Keywordsdendriticcell;HLAG;Tlymphocyte;immunetolerance移植排斥所導(dǎo)致的移植物抗宿主病(GVHD)是骨髓移植領(lǐng)域的難題。R前臨床免疫抑制劑的應(yīng)用雖然可以顯著降低急性GVHD的發(fā)生，但是慢性GVHD損害的發(fā)生仍然難以克服。誘導(dǎo)受者外周免疫耐受被認(rèn)為可能成為解決移植后慢性GV
6、HD的有效途徑［1］。樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)是體內(nèi)功能最強(qiáng)的專(zhuān)業(yè)性抗原呈遞細(xì)胞，是活化初始CD4+T細(xì)胞最有效的抗原呈遞細(xì)胞。近年來(lái)，人們逐漸認(rèn)識(shí)到DC在外周免疫耐受中的作用，并尋找誘導(dǎo)免疫耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞產(chǎn)生的有效途徑［2］。免疫耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞膜上高表達(dá)ILT3和ILT4分子，它們的可能配體是HLAG［3］。研究發(fā)現(xiàn)，HLAG促進(jìn)心臟移植后的外周免疫耐受狀態(tài)的產(chǎn)牛，其機(jī)制可能與誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞耐受有關(guān)［4］0木實(shí)驗(yàn)希望通過(guò)對(duì)HLAG誘導(dǎo)DC免疫耐受的機(jī)制的研究，探討誘導(dǎo)免疫耐受性DC產(chǎn)生的新的有效方法。材料和方法主
7、要試劑、細(xì)胞株及HLAG1真核表達(dá)質(zhì)粒RPMI1640培養(yǎng)液、DMEM培養(yǎng)液、G418、TRIZOL—步法提取RNA試劑及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購(gòu)于Gibco公司，Lipofectamine2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒購(gòu)于Invitrogen公司，小牛血清購(gòu)于杭州四季青公司。慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562、絨毛膜癌細(xì)胞株JEG3細(xì)胞來(lái)源于ATCC,培養(yǎng)于含15%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中。包括人HLAG1全長(zhǎng)cDNA的真核表達(dá)質(zhì)粒由CaroleOber博士惠贈(zèng)。K562細(xì)胞的轉(zhuǎn)染及藥物篩選脂質(zhì)體介導(dǎo)的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)參照Lipofcctamin
8、c2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。轉(zhuǎn)染細(xì)胞在800
9、ig/ml濃度G418條件下篩選穩(wěn)定株。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株表示為K562HLAG1,轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞株表示為K562RSV?？贵w
