蛹蟲草基質(zhì)多糖的急性毒性及亞慢性毒性研究

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1、蛹蟲草基質(zhì)多糖的急性毒性及亞慢性毒性研究　　摘要：以急性毒性試驗和亞慢性毒性試驗研究蛹蟲草基質(zhì)多糖（Cordycepsmilitarisstromapolysaccharides，CMSP）的安全性，急性毒性試驗采用ICR小鼠120只，隨機分成6組，設(shè)空白對照組和不同劑量CMSP試驗組（750、1500、3000、6000、12000mg/kg）。亞慢性毒性試驗采用SD大鼠80只，隨機分成4組，設(shè)空白對照組和低、中、高3個劑量CMSP試驗組（150、300、600mg/kg）。結(jié)果表明，在14d的觀察中，急性毒性試驗中各組小鼠未出現(xiàn)中毒癥狀和死亡情況，且灌胃

2、劑量超過10000mg/kg。亞慢性毒性試驗中，試驗各組與空白對照組在體重增加、攝食量、血液指標、血液生化指標、尿常規(guī)、臟器指數(shù)及組織病理相比無明顯差異，由此可知，CMSP實際為無毒物，且對大鼠未觀察到有害作用水平為600mg/（kg?d）?！　￡P(guān)鍵詞：蛹蟲草基質(zhì)多糖；急性毒性；亞慢性毒性　　中圖分類號：S567.3+9；R114文獻標識碼：A文章編號：0439-8114（2016）18-4776-07　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.036　　蛹蟲草（Cordyceps13militaris）又稱北蟲草

3、，屬于子囊菌門的真菌。在東南亞地區(qū)，蛹蟲草常被作為中藥或滋補品使用，這主要因其與傳統(tǒng)名貴中藥冬蟲夏草有相似的活性成分和藥理作用[1，2]。據(jù)報道，蛹蟲草富含多種功能活性物質(zhì)，如蟲草多糖、蟲草素、抗菌和抗腫瘤的腺苷衍生物、抗真菌素、L-色氨酸等[3，4]。蛹蟲草多糖是蛹蟲草的主要活性物質(zhì)之一，純化的蛹蟲草多糖具有多種生物活性，如抗氧化、抗腫瘤、抗炎、降血脂、調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老等作用[5-9]。目前，蛹蟲草主要通過人工栽培進行大量生產(chǎn)[10]，有研究表明收獲蛹蟲草后的廢基質(zhì)中的多糖含量約為子實體的2～4倍，同樣具有較好的抗氧化及保肝作用[11，12]。盡管蛹蟲草

4、作為一種重要的藥食兩用的真菌被人們長期廣泛地使用，但有關(guān)蛹蟲草基質(zhì)多糖安全性的研究尚未見報道。因此，為研制開發(fā)保健食品或天然藥物，有必要對蛹蟲草基質(zhì)多糖進行系統(tǒng)的安全性評價。本研究通過急性毒性試驗及亞慢性毒性試驗對蛹蟲草基質(zhì)多糖進行安全性評價，為蛹蟲草基質(zhì)多糖的進一步開發(fā)利用提供科學依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1材料與試劑　　蛹蟲草基質(zhì)多糖（Cordycepsmilitarisstromapolysaccharides，CMSP）由南京曉莊學院食品科學學院食品工程研究室提供?！　CR小鼠，動物合格證號：SCXK（蘇）2012-0004，質(zhì)量18～25g，

5、揚州大學比較醫(yī)學中心提供。SD大鼠，動物合格證號：SCXK（蘇）2014-0001，質(zhì)量50～70g，南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供?！　?.2儀器與設(shè)備　　RE-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；臺式冷凍干燥機（美國LABCONCO公司）；高速冷凍離心機（美國熱電公司）；NIKON50i型生物顯微鏡（日本尼康公司）；全自動血液分析儀（法國COMPACT公司）；AU5800型全自動生化分析儀（美國Beckman13Coulter公司）?！　?.3方法　　1.3.1蛹蟲草基質(zhì)多糖的制備準確稱取5.0g蛹蟲草基質(zhì)粉末于燒杯中

6、，加入200mL水，混勻，再加入2000U/mg的纖維素酶2.5mL，調(diào)節(jié)pH到4.8，然后50℃水浴1.5h，再轉(zhuǎn)移至80℃水浴2h，然后再進行超聲波（超聲40Hz，100%輸出功率，溫度30℃）處理40min，4200r/min離心10min，收集上清液。將沉淀按上述步驟提取2次，將收集到的上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)到一定體積，采用Sevag法除蛋白質(zhì)，除去蛋白質(zhì)后的溶液用95%的乙醇在4℃冰箱中醇沉過夜，經(jīng)抽濾，濃縮，經(jīng)DE-52柱層析及SephadexG-100凝膠柱層析，收集多糖液，經(jīng)濃縮，冷凍干燥得蛹蟲草基質(zhì)多糖?！　?.3.2經(jīng)口的小鼠急性毒性試驗取ICR

7、小鼠120只，雌雄各半，體重18～25g，在室溫22℃±3℃、濕度30%～70%、自由攝食、飲水的飼養(yǎng)條件下，適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后，隨機分成6組，每組20只，其中第Ⅰ～Ⅴ組為試驗組，第Ⅵ組為空白對照組，正式給藥前禁食8h，不禁水。采用改良寇氏法[13]，根據(jù)預(yù)試驗的劑量，Ⅰ～Ⅴ組分別以750、1500、3000、6000、12000mg/kg，5個不同劑量組進行灌胃染毒，分3次灌胃染毒溶解于蒸餾水中的蛹蟲草基質(zhì)多糖，每次間隔8h?？瞻讓φ战M同樣分3次灌服相同體積的蒸餾水。染毒1h后對小鼠的活動情況進行觀察，當天需進行多次密切觀察（特別染毒后4h內(nèi)），以后每天注意

8、觀察，連續(xù)觀察1413d，記錄小鼠的進食、活動、大小