蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖的急性毒性及亞慢性毒性研究

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1、蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖的急性毒性及亞慢性毒性研究　　摘要：以急性毒性試驗(yàn)和亞慢性毒性試驗(yàn)研究蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖（Cordycepsmilitarisstromapolysaccharides，CMSP）的安全性，急性毒性試驗(yàn)采用ICR小鼠120只，隨機(jī)分成6組，設(shè)空白對(duì)照組和不同劑量CMSP試驗(yàn)組（750、1500、3000、6000、12000mg/kg）。亞慢性毒性試驗(yàn)采用SD大鼠80只，隨機(jī)分成4組，設(shè)空白對(duì)照組和低、中、高3個(gè)劑量CMSP試驗(yàn)組（150、300、600mg/kg）。結(jié)果表明，在14d的觀察中，急性毒性試驗(yàn)中各組小鼠未出現(xiàn)中毒癥狀和死亡情況，且灌胃

2、劑量超過(guò)10000mg/kg。亞慢性毒性試驗(yàn)中，試驗(yàn)各組與空白對(duì)照組在體重增加、攝食量、血液指標(biāo)、血液生化指標(biāo)、尿常規(guī)、臟器指數(shù)及組織病理相比無(wú)明顯差異，由此可知，CMSP實(shí)際為無(wú)毒物，且對(duì)大鼠未觀察到有害作用水平為600mg/（kg?d）?！　￡P(guān)鍵詞：蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖；急性毒性；亞慢性毒性　　中圖分類(lèi)號(hào)：S567.3+9；R114文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：0439-8114（2016）18-4776-07　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.036　　蛹蟲(chóng)草（Cordyceps13militaris）又稱(chēng)北蟲(chóng)草

3、，屬于子囊菌門(mén)的真菌。在東南亞地區(qū)，蛹蟲(chóng)草常被作為中藥或滋補(bǔ)品使用，這主要因其與傳統(tǒng)名貴中藥冬蟲(chóng)夏草有相似的活性成分和藥理作用[1，2]。據(jù)報(bào)道，蛹蟲(chóng)草富含多種功能活性物質(zhì)，如蟲(chóng)草多糖、蟲(chóng)草素、抗菌和抗腫瘤的腺苷衍生物、抗真菌素、L-色氨酸等[3，4]。蛹蟲(chóng)草多糖是蛹蟲(chóng)草的主要活性物質(zhì)之一，純化的蛹蟲(chóng)草多糖具有多種生物活性，如抗氧化、抗腫瘤、抗炎、降血脂、調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老等作用[5-9]。目前，蛹蟲(chóng)草主要通過(guò)人工栽培進(jìn)行大量生產(chǎn)[10]，有研究表明收獲蛹蟲(chóng)草后的廢基質(zhì)中的多糖含量約為子實(shí)體的2～4倍，同樣具有較好的抗氧化及保肝作用[11，12]。盡管蛹蟲(chóng)草

4、作為一種重要的藥食兩用的真菌被人們長(zhǎng)期廣泛地使用，但有關(guān)蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖安全性的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，為研制開(kāi)發(fā)保健食品或天然藥物，有必要對(duì)蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖進(jìn)行系統(tǒng)的安全性評(píng)價(jià)。本研究通過(guò)急性毒性試驗(yàn)及亞慢性毒性試驗(yàn)對(duì)蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，為蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1材料與試劑　　蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖（Cordycepsmilitarisstromapolysaccharides，CMSP）由南京曉莊學(xué)院食品科學(xué)學(xué)院食品工程研究室提供。　　ICR小鼠，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（蘇）2012-0004，質(zhì)量18～25g，

5、揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供。SD大鼠，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（蘇）2014-0001，質(zhì)量50～70g，南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供?！　?.2儀器與設(shè)備　　RE-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；臺(tái)式冷凍干燥機(jī)（美國(guó)LABCONCO公司）；高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)熱電公司）；NIKON50i型生物顯微鏡（日本尼康公司）；全自動(dòng)血液分析儀（法國(guó)COMPACT公司）；AU5800型全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)Beckman13Coulter公司）?！　?.3方法　　1.3.1蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖的制備準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0g蛹蟲(chóng)草基質(zhì)粉末于燒杯中

6、，加入200mL水，混勻，再加入2000U/mg的纖維素酶2.5mL，調(diào)節(jié)pH到4.8，然后50℃水浴1.5h，再轉(zhuǎn)移至80℃水浴2h，然后再進(jìn)行超聲波（超聲40Hz，100%輸出功率，溫度30℃）處理40min，4200r/min離心10min，收集上清液。將沉淀按上述步驟提取2次，將收集到的上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)到一定體積，采用Sevag法除蛋白質(zhì)，除去蛋白質(zhì)后的溶液用95%的乙醇在4℃冰箱中醇沉過(guò)夜，經(jīng)抽濾，濃縮，經(jīng)DE-52柱層析及SephadexG-100凝膠柱層析，收集多糖液，經(jīng)濃縮，冷凍干燥得蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖?！　?.3.2經(jīng)口的小鼠急性毒性試驗(yàn)取ICR

7、小鼠120只，雌雄各半，體重18～25g，在室溫22℃±3℃、濕度30%～70%、自由攝食、飲水的飼養(yǎng)條件下，適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后，隨機(jī)分成6組，每組20只，其中第Ⅰ～Ⅴ組為試驗(yàn)組，第Ⅵ組為空白對(duì)照組，正式給藥前禁食8h，不禁水。采用改良寇氏法[13]，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的劑量，Ⅰ～Ⅴ組分別以750、1500、3000、6000、12000mg/kg，5個(gè)不同劑量組進(jìn)行灌胃染毒，分3次灌胃染毒溶解于蒸餾水中的蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖，每次間隔8h?？瞻讓?duì)照組同樣分3次灌服相同體積的蒸餾水。染毒1h后對(duì)小鼠的活動(dòng)情況進(jìn)行觀察，當(dāng)天需進(jìn)行多次密切觀察（特別染毒后4h內(nèi)），以后每天注意

8、觀察，連續(xù)觀察1413d，記錄小鼠的進(jìn)食、活動(dòng)、大小