臨床檢驗中化學(xué)發(fā)光免疫研究應(yīng)用探究

《臨床檢驗中化學(xué)發(fā)光免疫研究應(yīng)用探究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、臨床檢驗中化學(xué)發(fā)光免疫研究應(yīng)用探究【摘要】化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光與免疫分析方法相結(jié)合的產(chǎn)物，是目前最先進的標記免疫分析技術(shù)，結(jié)合了化學(xué)發(fā)光的高靈敏度和免疫分析的高選擇性，被廣泛應(yīng)用到臨床檢測和藥物分析中。隨著新固相材料的研制，新的發(fā)光試劑的產(chǎn)生，以及新的標記技術(shù)應(yīng)用，化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的靈敏度和現(xiàn)性大大提高，被更加廣泛的應(yīng)用到臨床檢驗中?！娟P(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光；免疫分析；臨床檢驗在臨床檢驗中常需要對各種表征性的物質(zhì)進行檢測分析來判斷疾病或其他身體病理特征，電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（ECLIA）是電化學(xué)發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物，是目

2、前最先進的標記免疫測定技術(shù)，能對各種物質(zhì)進行快速分析，該系統(tǒng)是由于在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，在分析化學(xué)中，化學(xué)發(fā)光是當(dāng)基態(tài)分子吸收化學(xué)能,反應(yīng)中釋放的能量躍遷到激發(fā)態(tài)，使得處于激發(fā)態(tài)的分子以光輻射的形式返回到基態(tài)時產(chǎn)生的光。ECLIA檢測法具有靈敏度高、準確度高、檢測速度快等特點，特別適用于微量物質(zhì)的測定。1化學(xué)發(fā)光免疫分析的工作原理化學(xué)發(fā)光免疫分析根據(jù)發(fā)光體系在免疫分析中的表現(xiàn)方式不同可分為：直接標記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析、電化學(xué)發(fā)光免疫分析和酶催化化學(xué)發(fā)光免疫分析。其中電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(ECLIA)是目前最先進

3、的標記免疫測定技術(shù)，能對各種物質(zhì)進行快速分析，靈敏度高，目前在臨床中的應(yīng)用極為廣泛，可以檢測細菌及病毒、檢測腫瘤標志物和檢測激素等。不同的發(fā)光體系他們的作用原理也不盡相同。1.1直接標記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析該方法是直接用化學(xué)發(fā)光劑標記抗原或抗體。標記的常用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)有叮噪酯類化合物，卩丫噪酯類是有效的發(fā)光標記物，首先起動發(fā)光試劑然后試劑作用而發(fā)光，強烈的直接發(fā)光在1秒內(nèi)完成，為快速的閃爍發(fā)光。叮唳酯因為其化學(xué)反應(yīng)簡單、快速、無需催化劑，而作為標記物用于免疫分析；在檢測小分子抗原時通常采用競爭法，而大分子抗原則通常采用夾心法，不會因為與

4、大分子結(jié)合而影響發(fā)光量。有人已經(jīng)采用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)進行的全自動雙抗夾心免疫測定方法，對患者血清B-HGC含量進行檢測法，操作簡便、敏感度高、特異性強、優(yōu)于一般的酶聯(lián)免疫法和放射免疫法[l]o1.2電化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析在電極表面進行反應(yīng)，用三丙胺來激發(fā)光反應(yīng)發(fā)光底物通常為三聯(lián)毗唳釘。在陽極，這兩種物質(zhì)可同時失去電子，發(fā)生氧化反應(yīng)。在電極板上三丙胺也在電極板上被氧化成三丙胺陽離子，與此同時二價的三聯(lián)毗除釘被迅速氧化成三價三聯(lián)毗噪釘。激發(fā)態(tài)的二價三聯(lián)毗噪釘在衰減的同時發(fā)射一個光子，然后重新回到基態(tài)二價三聯(lián)毗唳釘。這一過程在

5、電極表面反復(fù)進行，產(chǎn)生高效、穩(wěn)定的連續(xù)發(fā)光，并不斷增強。電化學(xué)發(fā)光免疫分析采用一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)即鏈霉親和素和生物素包被技術(shù)。以直徑為218um的磁性球作為載體，比板式的反應(yīng)面積擴大了20-30倍，利用生物素與鏈霉素親和素的牢固結(jié)合力，結(jié)合免疫放大能力和反應(yīng)系統(tǒng)中的磁分離功能，使免疫反應(yīng)在微球表面快速進行。并且，因為電發(fā)光過程產(chǎn)生許多光子，使光信號得以增強。因此，檢測靈敏度提高，線性范圍也可達6個數(shù)量級，可達到檢測濃度小于lPmol/L的超微量物質(zhì)。有人已經(jīng)采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法在檢測乙肝標志物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用電化學(xué)方法檢測靈敏度

6、更高，專屬性更強［2］。1.3酶催化化學(xué)發(fā)光免疫分析從標記免疫方面分析，酶催化化學(xué)發(fā)光免疫分析應(yīng)屬酶免疫分析，只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑，因此與酶免疫分析的操作步驟完全相同：以酶標記生物活性物質(zhì)進行免疫反應(yīng)，免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物，在信號試劑作用下發(fā)光，用發(fā)光信號測定儀進行發(fā)光測定。例如常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP),它們有各自的發(fā)光底物。堿性磷酸酶所用底物為環(huán)二氧乙烷衍生物，用于化學(xué)發(fā)光酶免分析底物而設(shè)計的分子結(jié)構(gòu)中包含起穩(wěn)定作用的基團-金剛烷基，其分子中發(fā)光基團為芳香基團和酶作用的基團，在

7、起動發(fā)光試劑作用下引起化學(xué)發(fā)光。馮艷銘等采用雙抗體異位點夾心法[3],用甲胎蛋白單克隆抗體作為固相包被，采用改良過碘酸鈉法進行甲胎蛋白多克隆抗體與堿性磷酸酶偶聯(lián)制備酶標抗體，以CSPD作為底物，建立了人血清AFP的化學(xué)發(fā)光免疫定量分析法。2化學(xué)發(fā)光免疫分析在臨床的應(yīng)用進展2.1檢測細菌及病毒細胞的是一切生命活動的基本組成單位，人體就是由千千萬萬的細胞集合而成，每個細胞就是一個獨立的小生命，而控制著細胞的核心物質(zhì)就是核酸，核酸是遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)，具有貯存、傳遞和表達遺傳信息的功能。因此對標本中的核酸進行定量檢測，對于臨床準確、及時的診斷疾病

8、，監(jiān)測治療效果是十分必要的。傳統(tǒng)采用普通的細菌培養(yǎng)方法往往存在培養(yǎng)時間過長等諸多缺陷，因此，現(xiàn)在很多實驗室都在尋求快速、靈敏的檢測方法。研究表明用放大核酸序列分析的方法對食物中沙門桿菌進行檢測，結(jié)果表明，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫