三七總皂苷對(duì)缺血再灌注損傷大鼠腦組織保護(hù)作用及對(duì)smac、xiap蛋白表達(dá)影響

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1、中文摘要三七總皂苷對(duì)缺血再灌注損傷大鼠腦組織的保護(hù)作用及對(duì)Smae、XIAP蛋白表達(dá)的影響摘要目的：觀察三七總皂苷(PNS)對(duì)缺血再灌注損傷后大鼠腦皮層組織丙二醛(MDA)的含量、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH．PX)的活性及對(duì)線粒體通路第二種天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶激活物(Smac)、凋亡抑制蛋白(XL廿)蛋白表達(dá)的影響，探討PNS對(duì)腦缺血再灌注損傷后的保護(hù)作用。方法：48只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分成3組，假手術(shù)組(A組)、缺血再灌注組(I瓜組)、三七總皂苷治療組(PNS組)。缺血90分鐘，根據(jù)再灌注時(shí)間不同分為再灌注10h、12h、24h亞組。各組動(dòng)物給藥方法：PNS組

2、腹腔注射1％PNS50mg／kg，每天一次，持續(xù)10天；假手術(shù)組和缺血再灌注模型組腹腔注射與PNS治療組等體積的生理鹽水10天，于術(shù)前1h再注射1次。采用線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈局灶缺血再灌注模型，動(dòng)物飼養(yǎng)及手術(shù)溫度控制在22℃左右，術(shù)前1d禁食不禁水，經(jīng)腹腔注射10％水合氯醛麻醉后，仰臥固定于固定器上，取頸正中切口，鈍性分離并暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和枕動(dòng)脈，結(jié)扎枕動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，在頸外動(dòng)脈距頸總動(dòng)脈分叉處3mm打結(jié)以供牽拉備用，頸內(nèi)動(dòng)脈近端備線，用手術(shù)顯微鏡分離頸內(nèi)動(dòng)脈至鼓泡處可見其顱外分支翼腭動(dòng)脈，并結(jié)扎，用動(dòng)脈夾分別夾閉頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，于頸外動(dòng)脈

3、兩線之間剪一切口，將魚線由此口插入，松開頸內(nèi)動(dòng)脈上動(dòng)脈夾，分別經(jīng)頸總動(dòng)脈分叉處、頸內(nèi)動(dòng)脈至大腦中動(dòng)脈，自頸總動(dòng)脈分叉處距大腦中動(dòng)脈處算，魚線插入深度約18．20mm。用備線結(jié)扎固定線栓后，松開頸總動(dòng)脈上的動(dòng)脈夾，清理手術(shù)部位，外留lcm線頭，逐層縫合，關(guān)閉切口。假手術(shù)組大鼠只暴露和分離出頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，不插線栓。栓塞90min后抽出魚線使其球端回至頸外動(dòng)脈內(nèi)，即可恢復(fù)大腦中動(dòng)脈血供進(jìn)行再灌注。動(dòng)物回籠飼養(yǎng)，保持大鼠肛溫37．5℃，直至動(dòng)物蘇醒，予以神經(jīng)功能評(píng)分。以大鼠手術(shù)麻醉清醒后神經(jīng)功能缺陷評(píng)分在1．3分，無(wú)蛛網(wǎng)膜下隙出血?jiǎng)游镞M(jìn)行實(shí)驗(yàn)。O分、4分或死亡剔除，再

4、隨機(jī)補(bǔ)充。實(shí)驗(yàn)取中文摘要材：于各時(shí)間點(diǎn)給予10％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，打開胸腔、暴露心臟，從左心部插入導(dǎo)管至主動(dòng)脈，松開雙側(cè)止血夾，立即用4％多聚甲醛對(duì)大鼠進(jìn)行在體灌注，直至大鼠心、肝、肺顏色變淺變白，四肢僵硬，然后迅速斷頭，取腦，除去小腦、腦干及嗅球，在視交叉前后lmm范圍切取組織，于4％多聚甲醛中固定24h，采用免疫組織化學(xué)染色觀察腦皮層組織形態(tài)病理學(xué)變化；同時(shí)檢測(cè)大鼠腦缺血再灌注不同時(shí)間XIAP和Smac陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)；采用原位末端缺口標(biāo)記法(n烈EL)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡；上述各組大鼠冰上迅速切去大腦皮層組織后，用冰冷的生理鹽水漂洗稱重，加入9倍質(zhì)量的預(yù)冷生理鹽水，用眼科

5、剪盡快剪碎組織塊，放進(jìn)玻璃勻漿管中進(jìn)行勻漿。將制備好的10％組織勻漿離心，3000轉(zhuǎn)／rain，共計(jì)15min，吸取上清，采用硫代巴比妥酸比色法檢測(cè)MDA的含量和二硫雙硝基苯甲酸法檢測(cè)GSH．PX的活性的檢測(cè)。結(jié)果：1、各組大鼠腦皮層組織形態(tài)病理學(xué)改變。HE染色法結(jié)果顯示：A組的大腦皮層組織結(jié)構(gòu)基本完整，核仁清晰，無(wú)明顯細(xì)胞水腫。I／R組亦可見細(xì)胞明顯腫脹，細(xì)胞核溶解，核仁消失。與IfR組相比，PNS組的細(xì)胞受損減輕，形態(tài)相對(duì)規(guī)則。2、神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示：A組腦組織偶見n烈EL陽(yáng)性細(xì)胞，與A組(5．06+0．04)比較，I／R組可見大量TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(63．74

6、+3．16)(P

7、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯減少(P<0．01)。4、三七總皂苷對(duì)MDA含量和GSH．PX活性的影響。結(jié)果顯示：缺血再灌注組隨時(shí)間的延長(zhǎng)，腦組織中MDA含量(O．67士0．04)較A組(0．45士0．04)相比均明顯增加(尸