三七總皂苷對缺血再灌注損傷大鼠腦組織保護作用及對smac、xiap蛋白表達影響

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1、中文摘要三七總皂苷對缺血再灌注損傷大鼠腦組織的保護作用及對Smae、XIAP蛋白表達的影響摘要目的：觀察三七總皂苷(PNS)對缺血再灌注損傷后大鼠腦皮層組織丙二醛(MDA)的含量、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH．PX)的活性及對線粒體通路第二種天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶激活物(Smac)、凋亡抑制蛋白(XL廿)蛋白表達的影響，探討PNS對腦缺血再灌注損傷后的保護作用。方法：48只Wistar雄性大鼠隨機分成3組，假手術組(A組)、缺血再灌注組(I瓜組)、三七總皂苷治療組(PNS組)。缺血90分鐘，根據再灌注時間不同分為再灌注10h、12h、24h亞組。各組動物給藥方法：PNS組

2、腹腔注射1％PNS50mg／kg，每天一次，持續(xù)10天；假手術組和缺血再灌注模型組腹腔注射與PNS治療組等體積的生理鹽水10天，于術前1h再注射1次。采用線栓法制備大鼠大腦中動脈局灶缺血再灌注模型，動物飼養(yǎng)及手術溫度控制在22℃左右，術前1d禁食不禁水，經腹腔注射10％水合氯醛麻醉后，仰臥固定于固定器上，取頸正中切口，鈍性分離并暴露左側頸總動脈、頸外動脈、頸內動脈和枕動脈，結扎枕動脈和頸外動脈遠心端，在頸外動脈距頸總動脈分叉處3mm打結以供牽拉備用，頸內動脈近端備線，用手術顯微鏡分離頸內動脈至鼓泡處可見其顱外分支翼腭動脈，并結扎，用動脈夾分別夾閉頸總動脈和頸內動脈，于頸外動脈

3、兩線之間剪一切口，將魚線由此口插入，松開頸內動脈上動脈夾，分別經頸總動脈分叉處、頸內動脈至大腦中動脈，自頸總動脈分叉處距大腦中動脈處算，魚線插入深度約18．20mm。用備線結扎固定線栓后，松開頸總動脈上的動脈夾，清理手術部位，外留lcm線頭，逐層縫合，關閉切口。假手術組大鼠只暴露和分離出頸總動脈、頸外動脈和頸內動脈，不插線栓。栓塞90min后抽出魚線使其球端回至頸外動脈內，即可恢復大腦中動脈血供進行再灌注。動物回籠飼養(yǎng)，保持大鼠肛溫37．5℃，直至動物蘇醒，予以神經功能評分。以大鼠手術麻醉清醒后神經功能缺陷評分在1．3分，無蛛網膜下隙出血動物進行實驗。O分、4分或死亡剔除，再

4、隨機補充。實驗取中文摘要材：于各時間點給予10％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，打開胸腔、暴露心臟，從左心部插入導管至主動脈，松開雙側止血夾，立即用4％多聚甲醛對大鼠進行在體灌注，直至大鼠心、肝、肺顏色變淺變白，四肢僵硬，然后迅速斷頭，取腦，除去小腦、腦干及嗅球，在視交叉前后lmm范圍切取組織，于4％多聚甲醛中固定24h，采用免疫組織化學染色觀察腦皮層組織形態(tài)病理學變化；同時檢測大鼠腦缺血再灌注不同時間XIAP和Smac陽性細胞數(shù)；采用原位末端缺口標記法(n烈EL)檢測各組細胞凋亡；上述各組大鼠冰上迅速切去大腦皮層組織后，用冰冷的生理鹽水漂洗稱重，加入9倍質量的預冷生理鹽水，用眼科

5、剪盡快剪碎組織塊，放進玻璃勻漿管中進行勻漿。將制備好的10％組織勻漿離心，3000轉／rain，共計15min，吸取上清，采用硫代巴比妥酸比色法檢測MDA的含量和二硫雙硝基苯甲酸法檢測GSH．PX的活性的檢測。結果：1、各組大鼠腦皮層組織形態(tài)病理學改變。HE染色法結果顯示：A組的大腦皮層組織結構基本完整，核仁清晰，無明顯細胞水腫。I／R組亦可見細胞明顯腫脹，細胞核溶解，核仁消失。與IfR組相比，PNS組的細胞受損減輕，形態(tài)相對規(guī)則。2、神經細胞凋亡情況。結果顯示：A組腦組織偶見n烈EL陽性細胞，與A組(5．06+0．04)比較，I／R組可見大量TUNEL陽性細胞數(shù)(63．74

6、+3．16)(P

7、陽性細胞數(shù)均明顯減少(P<0．01)。4、三七總皂苷對MDA含量和GSH．PX活性的影響。結果顯示：缺血再灌注組隨時間的延長，腦組織中MDA含量(O．67士0．04)較A組(0．45士0．04)相比均明顯增加(尸