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《農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棗樹遺傳轉(zhuǎn)化研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棗樹遺傳轉(zhuǎn)化研究姓名：郝征申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：劉孟軍；趙錦20120531摘要棗樹(ZiziphusjujubaMill．)是我國原產(chǎn)重要果樹。棗樹由于花小、人工去雄難、坐果率低且胚敗育現(xiàn)象嚴(yán)重，使得其雜交育種非常困難。棗瘋病是由植原體引起致死性傳染病害，幾乎分布于國內(nèi)外所有棗區(qū)，絕大多數(shù)棗樹品種都對其敏感，已成為制約棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展的嚴(yán)重障礙。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，基因工程已成為現(xiàn)代植物改良育種的有效手段。本研究旨在探索建立農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棗樹遺傳轉(zhuǎn)化體
2、系，并利用發(fā)根農(nóng)桿菌提高棗樹對棗瘋病的抗性，為棗樹遺傳改良和棗瘋病防治提供技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下：1．建立了冬棗的花藥再生體系。誘導(dǎo)花藥愈傷的適宜培養(yǎng)基為1／2MS+I．0mg／L2，4．D+209／L麥芽糖+5．59／L瓊脂：花藥愈傷的適宜增殖培養(yǎng)基為MS+0．4mg／LTDZ+0．1mg／LNAA+20∥L麥芽糖+5．59／L瓊脂；1．0lIl∥LTDZ和0．4mg／LNAA的組合是誘導(dǎo)冬棗花藥愈傷出芽的適宜生長調(diào)節(jié)劑組合，誘導(dǎo)出芽率達100％，平均出芽數(shù)為3．9個／塊；0．2mg／LBA、0．
3、1mg／LIBA和1．5∥LPVA是玻璃苗恢復(fù)的適宜組合，玻璃苗恢復(fù)率為48．9％；在添加1．5mg／L認(rèn)A的生根培養(yǎng)基中，生根率最高(43．3％)，根長最長(4．2cm)。2．首次建立了月光棗的花藥再生體系。誘導(dǎo)花藥愈傷的適宜培養(yǎng)基為1／2MS+I．0mg／L2,4一D+209／L麥芽糖+5．5∥L瓊脂；月光花藥愈傷的適宜增殖培養(yǎng)基為MS+0．6mg／LTDZ+0．1mg／LNAA+209／L麥芽糖+5．59／L瓊脂。適宜月光愈傷分化出芽的培養(yǎng)基為：MS+5．59／L瓊脂+209／L麥芽糖+0．8mg
4、／LTDZ+4．0mg／LAgN03。其誘導(dǎo)出芽率為100％，平均出芽數(shù)為10．4個／塊；在培養(yǎng)基MS+5．59／L瓊JJ旨+309／L蔗糖+0．2mg／LBA+0．1mg／LIBA+I．59／LPVA_中玻璃苗可恢復(fù)成正常苗；添加2．0mg／LIBA的生根培養(yǎng)基中月光生根率最高；GA3的添加對于棗愈傷的生長和玻璃苗的恢復(fù)均為抑制作用。3．建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的冬棗葉片遺傳轉(zhuǎn)化體系。適宜的遺傳轉(zhuǎn)化條件為：根癌農(nóng)桿菌的OD600為O．8，侵染20min后，在共培養(yǎng)基MS+5．59／L瓊n旨+E09／L麥芽
5、糖+1．OmedLTDZ+0．1mg／LIBA+2009MAS(pn5．8)中暗培養(yǎng)3d。首次將雙抗蟲基因(Bt基因和蛋白抑制劑基因彳以)轉(zhuǎn)入冬棗中，得到了8個轉(zhuǎn)基因株系。4．建立了冬棗葉片及冬棗瘋組培苗的發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。冬棗葉片誘導(dǎo)毛根的適宜條件是在菌液濃度OD600為0．8時侵染葉片20min，在共培養(yǎng)基1／2MS+4．0medLIBA+5．5edL瓊脂+309／L蔗糖(pH5．8)中暗培養(yǎng)3．5d，然后轉(zhuǎn)接入培養(yǎng)基1／2MSo+CROlOoIIl∥L中，光照條件為光照／黑暗為14／1
6、0h。冬棗瘋組培苗莖段誘導(dǎo)出毛根的適宜條件為：在菌液中添加50I．tM的AS預(yù)活化l~2h，OD600為0．8侵染5～10rain，共培養(yǎng)5d，共培養(yǎng)基為MS+5．59／L瓊)l旨+209／L蔗糖+100mg／LCRO，光照條件為光照／黑暗為14／10h。首次通過發(fā)根農(nóng)桿菌侵染使冬棗瘋組培苗轉(zhuǎn)化為正常植株，得到了30個抗病性提高的轉(zhuǎn)健苗株系。關(guān)鍵詞：冬棗，瘋組培苗，遺傳轉(zhuǎn)化，房芒基因，蛋白抑制劑基因，根癌農(nóng)桿菌，發(fā)根農(nóng)桿菌，棗瘋病抗性Agrobacterium-mediatedtransformatio
7、nofChinesejujubeName：HaoZhengMajor．PomologySuperviser：．ProfessorLiuMengjunProfessorZhaoJinAbstractChinesejujube(ZiziphusjujubaMill．)isanimportantnativefruittreeofChina．ConventionalCTOOSisverydifficultinChinesejujubeforreasonsofverylowfruit-setting，veryhi
8、ghembryoabortionaswellasverysmallflower．Withthedevelopmentofbiotechnology,geneticengineeringhasbecomealleffectivemeansformodemplantbreedingimprovement．Thisstudyisaimedattoestablishingallgenetictransformationsystemandlaying
