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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文替米沙坦對(duì)NAFLD大鼠肝臟及大網(wǎng)膜脂肪組織中PPARγ表達(dá)的影響姓名：姬霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：蔣樹林201203中文摘要替米沙坦對(duì)NAFLD大鼠肝臟及大網(wǎng)膜脂肪組織中PPARY表達(dá)的影響摘要目的：非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfatliverdisease，NAFLD)是排除病毒，乙醇，化學(xué)物質(zhì)，放射線及自身免疫性疾病等損肝因素所致的以肝細(xì)胞脂肪變性為主要病理改變的慢性肝臟疾病。其病理過程大致分為單純性脂肪肝，脂肪性肝炎，脂肪性肝硬化3個(gè)類型。NAFLD與遺傳、環(huán)
2、境、代謝等因素有關(guān)，美國(guó)內(nèi)分泌醫(yī)師協(xié)會(huì)已將其列為代謝綜合征(matebolicsyndrome，MS)的組成成分之一。近年來(lái)，隨著生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，NAFLD發(fā)病率有逐漸上升的趨勢(shì)，目前已成為嚴(yán)重危害人類健康的肝臟疾病之一。NAFLD的發(fā)病機(jī)理目前存在“二次打擊"學(xué)說：第一次打擊涉及胰島素抵抗，由于機(jī)體的自我防御機(jī)制，此階段可有抗細(xì)胞凋亡通路的活化，脂聯(lián)素、IL．6等抗炎因子的表達(dá)增加，因此病變存在可逆性；第二次打擊主要是活性氧代謝產(chǎn)物的增加所致的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，ROS與生物膜的磷脂等多不飽和脂肪酸的側(cè)鏈結(jié)合，導(dǎo)致
3、生物膜的流動(dòng)性改變，通透性增加，核酸、酶等大分子功能受損，使脂肪變性的肝細(xì)胞發(fā)生凋亡壞死。作為NAFLD發(fā)病的中心環(huán)節(jié)，胰島素抵抗已成為很多藥物治療該病的靶點(diǎn)。白色脂肪組織(whiteadiposetissue，WAT)是機(jī)體重要的內(nèi)分泌器官，脂肪細(xì)胞因子水平(如IL．8，NGF)上升與代謝異常及胰島素抵抗存在因果關(guān)系，并導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)蓄積。PPAR丫是一種配體激活的核激素受體，在白色脂肪組織中高表達(dá)，具有調(diào)節(jié)脂肪酸代謝，誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化的作用，在前脂肪細(xì)胞到成熟脂肪細(xì)胞的演變過程中表達(dá)量逐漸增加，影響著脂肪細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育和
4、功能狀態(tài)，進(jìn)而影響白色脂肪組織的內(nèi)分泌功能。適度抑制其表達(dá)可以起到減輕胰島素抵抗的作用。解耦連蛋白2(uncouplingprotein2，UCP2)屬于解耦連蛋白家族，可以介導(dǎo)質(zhì)子躍遷，使能量以熱能的形式釋放，減輕細(xì)胞氧化應(yīng)激，在生熱及能量代謝中意義重大。NAFLD時(shí)，UCP2表達(dá)量增加，是一種適應(yīng)性反應(yīng)。替米沙坦，一種傳統(tǒng)的血管緊張素II受體拮抗劑，不僅可以抑制ATl中文摘要受體，還可作為PPARY的部分激動(dòng)劑，起到減輕胰島素抵抗的作用。有研究證實(shí)替米沙坦可促進(jìn)肝組織中PPAR1，的表達(dá)，但在白色脂肪組織中起何種作用目
5、前尚未有研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用高脂飲食建立NAFLD胰島素抵抗大鼠模型，觀察觀察替米沙坦干預(yù)前后血脂血糖，胰島素敏感性，轉(zhuǎn)氨酶的變化情況，并檢測(cè)肝組織及大網(wǎng)膜組織PPAR丫及肝組織中UCP2的表達(dá)變化，探討替米沙坦治療NAFLD的機(jī)制。方法：l動(dòng)物模型的制備：選取雄性(SpragueDawley)SD大鼠，正常對(duì)照組喂飼普通飼料，高脂對(duì)照組飼以84％普通飼料+高脂飼料，配方為：l％膽固醇、5％蛋黃粉、10％豬油，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由進(jìn)食及飲水。2實(shí)驗(yàn)分組：將SD大鼠40只隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NCgroup，n=15)、高脂對(duì)照組(F
6、Cgroup，n=15)，高脂+替米沙坦干預(yù)組(FTgroup，n=10)。飼養(yǎng)12周末時(shí)隨機(jī)取NC及FC組各5只做高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)及肝組織的HE染色，確定造模成功。后FT組給予替米沙坦(5mg／kg．d)灌胃并予高脂飲食，正常及高脂對(duì)照組則以等容量的生理鹽水灌服，每日一次，共持續(xù)4周。，3大鼠體重、肝濕重和肝指數(shù)的變化：應(yīng)用電子天平稱取體重及肝濕重，并根據(jù)以下公式計(jì)算肝指數(shù)：肝濕重／體重x100％。4胰島素敏感性測(cè)定：我們以高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)技術(shù)(euglycermichyperinsulinemiacla
7、mptechnique)在穩(wěn)態(tài)時(shí)葡萄糖的輸注速率(GIR)來(lái)評(píng)估胰島素的敏感性。5肝組織學(xué)檢查：應(yīng)用石蠟切片，采用蘇木精一伊紅(hematoxylin．eosin，HE)染色的方法，在光鏡下觀察肝臟病理學(xué)的變化情況。6大網(wǎng)膜組織中PPAR丫mRNA，肝組織中PPAR丫mRNA、ATlmRNA及UCP2mRNA表達(dá)：采用半定量逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(1洱PCR)的方法，平行觀察肝組織／大網(wǎng)膜組織(WAT)PPARYmRNA含量變化及肝組織PPAR仆ATl、UCP2mRNA的表達(dá)水平變化。采用磷鉬酸比色法測(cè)定肝組織ATP含量。7
8、血清生化學(xué)的檢測(cè)：取血清樣本，在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生化室的協(xié)助下，應(yīng)用全自動(dòng)血清生化分析儀檢測(cè)轉(zhuǎn)氨酶及血脂等生化指標(biāo)的變中文摘要化。．、‘。結(jié)果：1各組大鼠的體重、肝濕重和肝指數(shù)的變化：在16周末成功的復(fù)制了大鼠NASH的模型。FC組的大鼠體重(597．51-415．62)、肝濕重(21．934-1．
