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《大葉藻zomnhx2基因克隆分析與蘋果組培及耐鹽初步研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、碩士學位論文大葉藻ZomNHX2基因克隆分析與蘋果組培及耐鹽初步研究THECLONINGANDANALYSISOFZOMNHX2GENEFROMZOSTERAMARINAANDAPPLETISSUECULTUREWITHAPRELIMINARYSTUDYOFSALT-RESISTANCE盧美鳳哈爾濱工業(yè)大學2015年6月國內圖書分類號:Q37學校代碼:10213國際圖書分類號:582.261/.279密級:公開理學碩士學位論文大葉藻ZomNHX2基因克隆分析與蘋果組培及耐鹽初步研究碩士研究生:盧美鳳導師:郭長祿副教授申請學位:理學碩士學科:
2、生物學所在單位:海洋科學與技術學院答辯日期:2015年6月授予學位單位:哈爾濱工業(yè)大學ClassifiedIndex:Q37U.D.C:582.261/.279DissertationfortheMasteralDegreeinScienceTHECLONINGANDANALYSISOFZOMNHX2GENEFROMZOSTERAMARINAANDAPPLETISSUECULTUREWITHAPRELIMINARYSTUDYOFSALT-RESISTANCECandidate:LuMeifengSupervisor:AssociatePro
3、f.GuoChangluAcademicDegreeAppliedfor:MasterofScienceSpeciality:BiologyAffiliation:SchooloftheMarineScienceandTechnologyDateofDefence:June,2015Degree-Conferring-Institution:HarbinInstituteofTechnology哈爾濱工業(yè)大學理學碩士學位論文摘要大葉藻(Zosteramarina)屬于大葉藻屬(ZosteraL.)海洋高等被子植物,生活在含鹽量高達600mm
4、ol/L的海水中,被認為耐鹽性很高,這表明大葉藻是研究耐鹽基因及耐鹽機理的絕佳材料。Na+/H+逆向轉運蛋白在植物耐鹽性方面具有重要作用,可以將細胞質內過量的Na+排出細胞或區(qū)隔化到液泡中,減少鹽離子特別是Na+對細胞的毒害,提高植物耐鹽性。本文從大葉藻中成功克隆出液泡膜Na+/H+逆向轉運蛋白基因(ZomNHX2基因)并對其進行生物信息學分析,通過半定量RT-PCR技術探討該基因的組織表達特異性。建立蘋果組織培養(yǎng)再生體系,為將進一步構建表達載體用于蘋果遺傳轉化,驗證液泡膜ZomNHX2基因的功能奠定基礎。具體結果如下:1.根據genban
5、k中的序列信息設計特異性引物,通過RT-PCR技術克隆得到大葉藻ZomNHX2基因,長度為1626bp,可編碼541個氨基酸。預測蛋白分子量為59.5kDa。2.氨基酸序列比對分析表明,大葉藻ZomNHX2與其他植物的Na+/H+逆向轉運蛋白具有較高同源性,其中與馬藺具有最高的同源性。同源比較發(fā)現大葉藻ZomNHX2具有Na+/H+逆向轉運蛋白基因典型的氨氯吡嗪結合位點保守區(qū)域(LFFIVLLPPI)。二級結構預測顯示,ZomNHX2的二級結構以α螺旋為主。疏水性分析表明,ZomNHX2的N端具有很強的疏水性,C末端具有較強的親水性,整個蛋
6、白表現為疏水性??缒そY構分析推測,ZomNHX2蛋白具有10個跨膜結構域。系統發(fā)育樹顯示大葉藻與馬藺的親緣關系較近。3.利用半定量RT-PCR技術對大葉藻ZomNHX2基因在莖和葉中的表達特異性進行分析,發(fā)現該基因在葉中表達量高于其在莖中表達量。4.建立蘋果再生體系。外植體根、莖、葉和子葉在激素誘導下只能形成愈傷組織,而胚芽經MS+KT(1mg/L)+NAA(0.2mg/L)培養(yǎng)基的誘導可高效再生叢生芽。為獲得完整幼苗進行生根試驗,篩選出最適生根的培養(yǎng)基為1/2MS+NAA(0.2mg/L)。5.蘋果幼苗耐鹽性研究發(fā)現蘋果幼苗的鹽害率隨著N
7、aCl濃度的升高而升高,隨著脅迫時間的延長而升高。建議選用4g/L-8g/L的NaCl處理轉基因蘋果幼苗進行耐鹽性分析。-I-哈爾濱工業(yè)大學理學碩士學位論文關鍵詞:大葉藻;ZomNHX2基因;克?。槐磉_;蘋果組培;耐鹽性-II-哈爾濱工業(yè)大學理學碩士學位論文AbstractZosteramarinabelongstoZosteraL.,isamarinehigherangiosperm.Zosteramarinalivesintheseawaterwhichcontentssaltashighas600tendency,sothesalt-
8、resistanceofZosteramarinaisconsideredtobewell.Thatconfirmsthatitisaperfectmaterialforther