青稞耐鹽性品種（系）的篩選及rbcs基因的克隆與表達(dá)分析

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1、萬方數(shù)據(jù)SichuanAgriculturalUniversityMasterDissertationSaltToleranceQingkeVarieties(1ines)ScreeningandrbcSGeneCloningandItsExpressionAnalysisinqingke(HullessBarley)ByGuo-ChangQiAdvisor：Prof．ZongyunFengMajor：BiochemistryandMolecularBiologyDirection：PlantMolecul

2、arBiologyMay,2014萬方數(shù)據(jù)IWilKqBliHHilqHKliiHliitI論文獨創(chuàng)性聲明、姻一121墮一本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名．并r虱侈∥7l?！疿ly2p腳年6月7日關(guān)于論文使

3、用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。I口厴論文不保密?？诒菊撐谋Ｃ?，在—-年解密后適用本授權(quán)。＼／。(請在以上口內(nèi)劃“√”)研究生簽名：打l虱呂引醛孫易紅加f印年6月7日沙，眵年占月7日萬方數(shù)據(jù)摘要土地鹽堿化是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)面臨的生產(chǎn)難題之一，與此同時，隨著生態(tài)環(huán)境的惡

4、化和不合理的開發(fā)利用，使得這一問題變得更加突出。如何開發(fā)利用大量的鹽堿地對現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。其中篩選培育優(yōu)良的耐鹽堿作物是對鹽堿地進(jìn)行經(jīng)濟高效改良的重要措施之一。青稞作為一種高原特色農(nóng)作物具有生育期短、消耗土地肥力小、但產(chǎn)量并不低、同時又具有很好耐鹽堿性的特點，因此，篩選鑒定一批耐鹽堿較好的青稞品種(系)對于鹽堿地進(jìn)行改良或者是對植物耐鹽機理的研究都具有比較重要的作用。此外，從分子生物學(xué)水平對植物的耐鹽能力進(jìn)行研究也是當(dāng)前研究的熱點，因為這將大大提高培育具有較強耐鹽能力作物的速率?；诖?，本實驗

5、對來自西藏、四川和甘肅三個地區(qū)的34份青稞品種(系)進(jìn)行了芽期和苗期的耐鹽性篩選鑒定，同時對和植物耐鹽性相關(guān)的rbcS基因進(jìn)行克隆，并對其在鹽分脅迫條件下的表達(dá)情況進(jìn)行了研究。得到的主要研究結(jié)果如下：1．通過測定34份青稞材料的發(fā)芽勢、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)等指標(biāo)并應(yīng)用主成分分析、隸屬函數(shù)法等方法對青稞材料進(jìn)行了多指標(biāo)耐鹽性綜合評價。結(jié)果表明：耐鹽性較強的材料是XQ0478、白玉青稞、XQ0792、XQ0198和N4—1等；耐鹽性相對較弱的材料有矮黑六、矮六密、9718和9803．2。用綜合指標(biāo)值(D)進(jìn)行聚類分

6、析，可將34份青稞品種(系)聚為三類：A、B、C，A類的青稞材料有8份，其D>0．5，代表耐鹽性較強的品種(系)；B類的青稞材料有4份，其D<0．3，代表耐鹽性較敏感的品種(系)；C類的青稞材料有22份，其0．3三D三0．5，為中度耐鹽性品種(系)。2．用來自西藏、四川和甘肅的34份地方青稞品種(系)為實驗材料，以葉綠素(Chl)含量、細(xì)胞膜通透性和超氧化物歧化酶(SOD)含量等6個指標(biāo)，運用相關(guān)分析、主成分分析和隸屬函數(shù)法等分析方法，對青稞苗進(jìn)行耐鹽性綜合分析。結(jié)果表明：耐鹽性較強的材料是長芒紅四棱、矮黑

7、六和XQ0391；耐鹽性相對較弱的材料是XQ0317、XQ0497和XQ0491等。對青稞材料綜合評價結(jié)果(D)進(jìn)行聚類分析，可將34份青稞品種(系)聚為3類，A類綜合評價值D耋0．6，有3份材料是耐鹽性相對較強的青稞材料。B類綜合評價值0．44三D<0．6，有18份材料是中度耐鹽的青稞材料；C類的綜合評價值D<0．44，有13份材料是相對鹽敏感青稞材料。，并將評價結(jié)果與芽期耐鹽性評價結(jié)果進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在這34份青稞材料中有11份青稞材料在芽期和苗期耐鹽性相同，其余材料在芽期和苗期表現(xiàn)出不同的耐鹽能

8、力。萬方數(shù)據(jù)3．根據(jù)大麥和小麥已知的l，5一二磷酸核酮糖羧化／JJn氧酶(Rubisco)小亞基基因rbcS的保守序列設(shè)計簡并引物，通過同源PCR克隆技術(shù)擴增出了青稞rbcS基因的一條DNA序列和一條eDNA序列。經(jīng)過測序和BLAST分析，結(jié)果顯示：對比DNA序列和cDNA序列發(fā)現(xiàn)在DNA序列中含有一個長度為107bp的內(nèi)含子。將得到的rbeS基因的核苷酸序列與其他物種的同源序列進(jìn)行比對后發(fā)現(xiàn)，rbcS基因與小麥