慢性乙型肝炎患者淋巴細(xì)胞亞群變化及意義

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1、慢性乙型肝炎患者淋巴細(xì)胞亞群變化及意【摘要】目的:通過觀察慢性乙型肝炎病人與正常人外周血中淋巴細(xì)胞亞群的變化,研究乙肝的發(fā)病機制與宿主細(xì)胞免疫功能的關(guān)系。方法:收集2009年10月至2010年3月在黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診的慢性乙肝病人32例和健康人20例的外周血,使用流式細(xì)胞儀檢測淋巴細(xì)胞亞群并分析其差異及臨床意義。結(jié)果:慢性乙肝患者與正常對照組比較,CD3+、CD44+及CD3+細(xì)胞數(shù)均減少(P<0.05);與正常對照相比外周血NK細(xì)胞減低(P〈0.05);與正常對照相比外周血B淋巴細(xì)胞升高(P〈0.05)o結(jié)論:慢性乙肝患

2、者血中細(xì)胞免疫功能紊亂,T淋巴細(xì)胞亞群失衡等可能與乙肝病毒感染后慢性化有關(guān)?!娟P(guān)鍵詞】慢性乙型肝炎;T細(xì)胞亞群;NK細(xì)胞;B淋巴細(xì)胞【中圖分類號】R512.6+2【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2012)10-0074-02乙型肝炎病毒(HBV)感染人數(shù)眾多,我國HBV感染率為60%,乙肝表面抗原陽性率約10%,是導(dǎo)致慢性肝病最常見的原因。HBV感染可以引起肝細(xì)胞的免疫性損害,其病理過程涉及到T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK、NKT等細(xì)胞。本文通過分析慢性乙肝病人與健康人免疫細(xì)胞的差異,來探討乙型肝炎發(fā)病機制與宿主細(xì)胞免疫功能的關(guān)系

3、。1材料和方法2009年10月至2010年3月在黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬-第一醫(yī)院就診的慢性乙型肝炎病人32例和健康人20例,診斷符合肝病學(xué)會聯(lián)合修訂的病毒性肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)。乙肝患者中男23例、女9例,年齡18-63歲,平均年齡34±13歲,血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶均超過正常2倍以上。所有病人均未接受過任何與肝病相關(guān)的治療。健康對照組20例,男14例、女6例,年齡18—61歲,平均年齡34±9歲。1.1儀器與試劑使用美國BD公司FACSCuliber流式細(xì)胞儀測定樣本中的淋巴細(xì)胞亞群,試劑均由該公司提供。1.2檢測方法標(biāo)本制備:(1)用K2-EDT

4、A抗凝管收集外周靜脈血2ml混勻,2ml用于流式細(xì)胞儀測定,室溫下送檢。(2)抗體標(biāo)記:取2支檢測管,分別加入如下抗體組合,每種抗體20u1。①CD4、CD8.CD3細(xì)胞亞群抗體;②CD16+56.C嘰9抗體;(3)上述管中加入50卩1全血,混勻避光室溫孵育20分鐘;(4)加入500U1OFHLYSE—c溶血素,混勻避光26°C水浴溶血10分鐘;(5)加入2mlPBS洗液,振蕩混勻,1500r/min,離心5rain,棄上清;(6)重復(fù)步驟(5);(7)每管加入0.5mlPBS洗液,混勻避光放置,2h內(nèi)完成上機檢測。儀器檢查達標(biāo)準(zhǔn)后開始

5、檢測。每管讀取細(xì)胞5000個,將流式細(xì)胞儀檢測的各亞群占淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分比與血常規(guī)結(jié)果中淋巴細(xì)胞計數(shù)值相乘,得到各亞群細(xì)胞的數(shù)。1.3統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)用土s表示。采用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析。多組比較采用方差分析,組間兩兩比較采用q檢驗。P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果每組之間淋巴細(xì)胞亞群、淋巴細(xì)胞及白細(xì)胞總數(shù)進行比較:病人組淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞計數(shù)顯著低于對照組。淋巴細(xì)胞亞群中B細(xì)胞計數(shù)、NK細(xì)胞計數(shù)低于對照組(見表1);外周血CD4+T、CD8+細(xì)胞低于對照組(見表2)。3討論HBV主要是通過引起宿主自身的免疫反應(yīng)而造成肝細(xì)胞的損傷

6、。國內(nèi)外初步研究顯示,慢性乙型肝炎病人體內(nèi)存在著細(xì)胞免疫功能的紊亂,T淋巴細(xì)胞亞群失衡,使機體不能有效清除入侵的乙肝病毒,導(dǎo)致疾病的慢性化。我們通過檢測慢性乙肝病人和正常人的淋巴細(xì)胞亞群的變化,來了解是否存在淋巴細(xì)胞亞群免疫功能紊亂。實驗結(jié)果顯示,與正常對照相比,慢性乙肝患者CD4+、CD8+T細(xì)胞計數(shù)減少。CIM+T為輔助性T細(xì)胞,能促進B細(xì)胞等其他免疫細(xì)胞的增殖和分化,調(diào)節(jié)體液免疫和細(xì)胞免疫;CD8+T細(xì)胞由細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞組成。國內(nèi)外研究顯示在急性乙肝患者體內(nèi)存在著針對乙型肝炎病毒強烈多克隆CIM+T細(xì)胞反應(yīng)和細(xì)胞

7、毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng),而在慢性乙肝患者中這種反應(yīng)很弱或檢測不到。這就提示乙型肝炎病毒感染后HBV特異性CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)對病毒的清除和疾病的轉(zhuǎn)歸起重要的作用。CIM+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞計數(shù)的減少,可能導(dǎo)致機體細(xì)胞免疫功能降低,乙肝病毒感染后不易被清除,與疾病慢性轉(zhuǎn)歸密切相關(guān),但是,CD8+T細(xì)胞數(shù)量改變不能完全反映其功能上的變化,并且外周血中CD8+T細(xì)胞數(shù)量并不能完全反映肝細(xì)胞的情況。因此,尚需完善T細(xì)胞功能方面的檢測及進行肝組織活檢來進一步分析CTL與乙肝臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。慢性乙肝患者NK細(xì)胞計數(shù)低于正常對

8、照。NK細(xì)胞是機體自然免疫的主要承擔(dān)者,也是獲得性細(xì)胞免疫的核心細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞缺陷的病人易發(fā)生多種危及生命的病毒感染,這可能與NK細(xì)胞缺乏導(dǎo)致的CTL功能喪失有關(guān)。在對乙肝病毒的細(xì)胞免疫中HBV特異

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