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1、萬方數(shù)據(jù)中圖分類號睦孑芩UDC已!里博士學(xué)位論文學(xué)校代碼密級10533WDR62蛋白在胃癌發(fā)生中的作用及其表達(dá)與胃癌耐藥和預(yù)后的相關(guān)性研究ImpactofWDR62proteininthedevelopmentofhumangastriccancerandassociationofWDR62。with’；istanceandexDresslonwitharugresistananoprognosi。si’ngastriccancer作者姓名：曾珊學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：腫瘤學(xué)學(xué)院(系、所)：湘雅醫(yī)院指導(dǎo)教師：鐘美佐教授答辯委員會主席中南大學(xué)二0一三年十一月萬方數(shù)據(jù)
2、學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明fY㈣2㈣68㈣60舢2舢刪28本人鄭重聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。作者簽名：望盟：日期：絲年上月墊學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者和指導(dǎo)教師完全了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定：即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位
3、論文的復(fù)印件和電子版；本人允許本學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢詫⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文待解密后適應(yīng)本聲明。作者簽名：血導(dǎo)師簽日期：月叢日萬方數(shù)據(jù)WDR62蛋白在胃癌發(fā)生中的作用及其表達(dá)與胃癌耐藥和預(yù)后的相關(guān)性研究中文摘要目的胃癌是近發(fā)病率排名第四的惡性腫瘤，接近2／3的胃癌發(fā)生在發(fā)展中國家，而其中有42％發(fā)生在中國。盡管在胃癌的診斷方法及治療手段上已取得不少進(jìn)展，但在癌癥相關(guān)死亡率排名中，胃癌仍高居世界第二。化療是目前應(yīng)用于胃癌的臨床治療方案中非常重要的一個(gè)手段，對于術(shù)后殘留癌細(xì)胞的
4、清除、防止復(fù)發(fā)、改善預(yù)后等方面都具有積極作用。但是越來越多的臨床證據(jù)表明，目前常用于一線治療的多種藥物及多種給藥方案的總體療效評價(jià)不甚理想，為進(jìn)一步探詢內(nèi)在原因及探索新的治療方案提出要求。WD重復(fù)區(qū)域62(WDR62)是最近發(fā)現(xiàn)的和中心體相關(guān)的基因，它有32個(gè)外顯子，1個(gè)CpG島和poly(A)尾。WDR62位于人類染色體19q13．12區(qū)，而且靠近CEBPG，GPI和UBA2基因的功能區(qū)，參與細(xì)胞循環(huán)與增殖等生物學(xué)過程。這些基因都己被證實(shí)在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期中發(fā)揮極其重要的作用。WDR62蛋白有13個(gè)WD重復(fù)區(qū)域，在C末端有6個(gè)可以被絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)
5、磷酸化激活的位點(diǎn)，具有調(diào)控細(xì)胞信號通路、轉(zhuǎn)錄、有絲分裂和細(xì)胞凋亡的功能。當(dāng)有絲分裂發(fā)生時(shí)，WDR62的內(nèi)源性表達(dá)大量聚集在分裂細(xì)胞的紡錘體極，而不是在細(xì)胞核周萬方數(shù)據(jù)圍，提示我們WDR62在腫瘤細(xì)胞的增殖過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，但WDR62在人類惡性腫瘤中的作用仍然未知。本研究的目的即在于明確WDR62在人類胃癌發(fā)展與預(yù)后中的作用。方法采集’372例臨床胃癌患者的癌組織及癌旁胃粘膜標(biāo)本，分別進(jìn)行蘇木素伊紅(班)染色劑免疫組織化學(xué)染色。請兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理診斷學(xué)家分別獨(dú)立閱片確認(rèn)胃腺癌的診斷。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及WesternBlotting法檢測各組織標(biāo)本中WDR62的
6、表達(dá)水平。采集胃癌病例的臨床病理學(xué)特征，收集隨訪資料，建立Cox回歸模型分析WDR62表達(dá)水平、臨床病理學(xué)特征與預(yù)后之間的關(guān)系。細(xì)胞培養(yǎng)8株人類胃癌細(xì)胞系(AGS，SGC7901，BGC．823，MGC．803，HGC．27，SGC7901NCR，SGC7901／DDP和SGC7901／ADM)，用定量RT-PCR及Westernblotting檢測WDR62的表達(dá)水平。構(gòu)建慢病毒質(zhì)粒載體分別轉(zhuǎn)染BGC．823和多重耐藥株SGC7901ⅣCR細(xì)胞，研究沉默WDR62對細(xì)胞生殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力、細(xì)胞周期、凋亡發(fā)生、細(xì)胞活力、化療敏感性等的影響，并檢測WDR62，cycli
7、nB，CDKl，caspase3及Akt、ERK等其他若干信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的mRNA及蛋白表達(dá)水平。分別用慢病毒LV-shRNA—ControlandLV-shRNA．WDR62轉(zhuǎn)染的BGC．823和SGC790lⅣCR細(xì)胞行裸鼠皮下成瘤試驗(yàn)，31天后，處死裸鼠，取出腫瘤測量其大小及重量，并行HE染色，IHC染色WDR62及Ki67。萬方數(shù)據(jù)結(jié)果用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT．PCR)法檢測372例胃癌組織標(biāo)本及其癌旁胃粘膜組織標(biāo)本(NT)中WDR62mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中的WDR62mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織(O．00654-O．0016
