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《副溶血弧菌耐熱溶血毒素(TDH)抗腫瘤作用研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、學校代碼：10264研究生學號：上海海洋大學碩士學位論文題目：副溶血弧菌耐熱溶血毒素（TDH）抗腫瘤作用研究英文題目：Studyontheantitumoreffectofvibrioparahaemolyticus(TDH).專業(yè)：研究方向：姓名：指導教師：二O一八年四月上海海洋大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學術(shù)道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責，并完全意
2、識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學學位論文版權(quán)使用授權(quán)書學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學位論文屬于不保密□學位論文作者簽名：指導教師簽名：日期：年月日日期：年月日副溶血弧菌耐熱溶血毒素（TDH）抗腫瘤作用研究摘要近年來，由于手術(shù)、放療、化療等腫瘤治療手段
3、的局限性，尋找新的治療途徑迫在眉睫，而生物毒素抗腫瘤則為治療癌癥提供了新的方向，通過對生物毒素進行修飾，可以靶向性的針對一些癌癥病例的治療。本文以TDH為研究對象，圍繞TDH的提取純化、TDH對不同細胞相對活力的測定、TDH的抗腫瘤作用以及TDH抗腫瘤機制的初步探索這四個部分展開實驗，以期研究TDH的抗腫瘤作用以及機制。主要研究內(nèi)容如下：1、通過對副溶血弧菌進行活化，將細菌培養(yǎng)液通過硫酸銨鹽析、透析、葡聚糖凝膠層析、超濾膜濃縮進行分離，提取與純化，得到純度較高的TDH。利用SDS-PAGE電泳和溶血實驗鑒定TDH的分子條帶和生物活性，考馬斯亮藍法測定其濃度。結(jié)
4、果顯示：優(yōu)化方法之后可從1.5L細菌培養(yǎng)液中得到14mg純化較高的TDH。2、MTT法測定SPC-A-1、Hela、7721、NCM460和LO2這幾株細胞的相對活力。測定其IC50，篩選出對TDH較為敏感的細胞進行實驗。結(jié)果顯示：TDH處理SPC-A-1、7721、Hela、NCM460和LO2細胞24h之后的IC50值分別為6.7μg/mL、47.3μg/mL、29μg/mL、151μg/mL、118μg/mL。由此可知，TDH對腫瘤細胞的毒性遠大于正常細胞，對腫瘤細胞具有選擇性。3、MTT法檢測TDH對SPC-A-1和Hela細胞的生長曲線的影響；“創(chuàng)傷
5、實驗”檢測TDH對SPC-A-1細胞遷移能力的影響；細胞克隆實驗檢測TDH對SPC-A-1細胞增殖能力的影響；流式細胞術(shù)檢測TDH對SPC-A-1和Hela細胞周期、AnnexinV-FITC、PI染色后的細胞凋亡的影響。結(jié)果顯示：TDH能夠劑量依賴性的抑制這兩株腫瘤細胞的生長、增殖、遷移，能夠在不同時期對腫瘤細胞發(fā)生阻滯作用，抑制腫瘤細胞的生長。同對照相比，我們可以看到TDH能夠很顯著的誘導細胞早期凋亡，如用5μg/mL的TDH處理SPC-A-1細胞24h，早期凋亡率達到33.3%。4、流式細胞術(shù)檢測TDH對SPC-A-1和Hela細胞的線粒體膜電位的影響；
6、試劑盒檢測TDH引起SPC-A-1和Hela細胞中caspase-3活化程度的變化情況。結(jié)果顯示：對于這兩株細胞，在相同藥物濃度的處理下，TDH能夠較明顯的誘導細胞凋亡，但線粒體膜電位卻沒有發(fā)生變化，而Caspase-3的活化程度隨著處理時間的延長有一個較明顯的增強，說明了TDH誘導腫瘤細胞凋亡與線粒體途徑?jīng)]有關系，與Caspase-3的活化有著密切聯(lián)系，為下一步細胞膜表明死亡受體途徑的研究提供了科學的依據(jù)。關鍵詞：副溶血弧菌耐熱溶血毒素（TDH），細胞毒性，抗腫瘤作用，細胞凋亡StudyontheantitumoreffectofVibrioparahaem
7、olyticusthermostablehemolysin(TDH).ABSTRACTInrecentyears,duetothelimitationsofsurgical,radiotherapy,chemotherapyandothermethodsofcancertreatment,findingnewwaysoftreatmentisimminent,whilebiotoxinantitumorprovidesanewdirectionforthetreatmentofcancer.Bymodifyingthebiologicaltoxins,thet
8、reatmentofsomecance
