資源描述：
《基于大菱鲆皮膚組織轉錄組的抗逆基因克隆、表達及功能研究.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、學校代碼：10264研究生學號：M150150265上海海洋大學碩士學位論文基于大菱鲆皮膚組織轉錄組的抗題目：逆基因克隆、表達及功能研究Cloning,expressionandfunctionofstress-resistantgenes英文題目：basedonthetranscriptomeofturbot（Scophthalmusmaximus）skintissue專業(yè)：漁業(yè)研究方向：魚類遺傳育種與抗逆生理姓名：唐啟政指導教師：王新安副研究員馬愛軍研究員二O一八年四月四日上海海洋大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守
2、學術道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經明確注明和引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內容負責，并完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學學位論文版權使用授權書學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權上海海洋大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有
3、關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本版權書。本學位論文屬于不保密□學位論文作者簽名：指導教師簽名：日期：年月日日期：年月日基于大菱鲆皮膚組織轉錄組的抗逆基因克隆、表達及功能研究Cloning,expressionandfunctionofstress-resistantgenesbasedonthetranscriptomeofturbot（Scophthalmusmaximus）skintissue學位論文完成日期：指導教師簽字：答辯委員會成員簽字:上海海洋大學碩
4、士學位論文基于大菱鲆皮膚組織轉錄組的抗逆基因克隆、表達及功能研究摘要大菱鲆（Scophthalmusmaximus）是原產于大西洋東北部、歐洲沿海的一種冷水性魚類。1992年由雷霽霖院士引進我國，目前已成為我國北方沿海重要的工廠化養(yǎng)殖魚類。然而北方沿海夏季氣溫、水溫都比較高，大菱鲆發(fā)病率、產卵量和死亡率較高，損害養(yǎng)殖效益，不利于大菱鲆工廠化養(yǎng)殖的進一步發(fā)展。本課題組從2007年開始對大菱鲆的耐溫性狀進行遺傳改良，選育生長性能優(yōu)良的耐高溫新品系，目前已取得了可喜的進展，選育后代耐溫性明顯提高。為加快育種進程，挖掘與高溫應答相關的
5、功能基因，解析大菱鲆應答高溫脅迫的分子機制，本研究通過分析高溫脅迫條件下的皮膚組織轉錄組測序數據，篩選出數個與高溫脅迫相關的抗逆基因，利用基因克隆、組織表達分析和原核表達等方法進行解析。以期在全基因組范圍內了解大菱鲆應答高溫脅迫的分子機制，為全面認識大菱鲆抗逆的分子機理奠定基礎，并為大菱鲆耐高溫遺傳育種新標記的開發(fā)提供新的理論基礎和研究方向。1.分析大菱鲆高溫皮膚轉錄組數據庫，對原始數據進行過濾，剔除了低質量數據后將cleanreads進行混合拼接，得到217609條Unigene作為參考序列用于后續(xù)分析；采用Nr，Nt，Sw
6、iss-Prot，KEGG，GO，KOG和Pfam七大數據庫對拼接的轉錄本進行功能注釋，并對Unigene進行KEGG，GO和KOG功能分類；利用DESeq軟件對實驗組和對照組的差異基因篩選，得到3497個差異基因，其中包括2043個上調基因和1454個下調基因。通過標注的基因功能，進一步篩選出10個與高溫脅迫相關的上調表達基因，設計簡并引物，PCR擴增ORF序列，測序驗證，得到6個序列正確的基因，分別為PDIA3、PDIA6、FTH1、HSP90β、SERPINH1、HSP70。2.利用RACE技術克隆上述6個基因，結果得到
7、大菱鲆PDIA3、PDIA6完整基因序列。其中PDIA3cDNA序列全長為2083bp，開放閱讀框為1479bp，5′非編碼區(qū)(UTR)和3′非編碼區(qū)分別為85bp和519bp；該基因ORF區(qū)可編碼一個由492個氨基酸殘基組成的蛋白質，相對分子質量為54.92kD，理論等電點為5.40，包含一個由17個氨基酸組成的信號肽；目前該基因序列已經提交至NCBI，I上海海洋大學碩士學位論文Genbank登錄號為MG765516。PDIA6基因cDNA序列全長為2018bp，其中開放閱讀框為1326bp，5′非編碼區(qū)(UTR)和3′非編
8、碼區(qū)分別為95bp和597bp；該基因ORF區(qū)可編碼一個由441個氨基酸殘基組成的蛋白質，相對分子質量為47.72kD，理論等電點為5.01，包含一個由19個氨基酸組成的信號肽；目前該基因序列已經提交至NCBI，Genbank登錄號為MG787152。3.通過qPCR分析6個
