資源描述：
《基于大菱鲆皮膚組織轉(zhuǎn)錄組的抗逆基因克隆、表達(dá)及功能研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號(hào)：M150150265上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文基于大菱鲆皮膚組織轉(zhuǎn)錄組的抗題目：逆基因克隆、表達(dá)及功能研究Cloning,expressionandfunctionofstress-resistantgenes英文題目：basedonthetranscriptomeofturbot（Scophthalmusmaximus）skintissue專業(yè)：漁業(yè)研究方向：魚類遺傳育種與抗逆生理姓名：唐啟政指導(dǎo)教師：王新安副研究員馬愛軍研究員二O一八年四月四日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守
2、學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有
3、關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日基于大菱鲆皮膚組織轉(zhuǎn)錄組的抗逆基因克隆、表達(dá)及功能研究Cloning,expressionandfunctionofstress-resistantgenesbasedonthetranscriptomeofturbot（Scophthalmusmaximus）skintissue學(xué)位論文完成日期：指導(dǎo)教師簽字：答辯委員會(huì)成員簽字:上海海洋大學(xué)碩
4、士學(xué)位論文基于大菱鲆皮膚組織轉(zhuǎn)錄組的抗逆基因克隆、表達(dá)及功能研究摘要大菱鲆（Scophthalmusmaximus）是原產(chǎn)于大西洋東北部、歐洲沿海的一種冷水性魚類。1992年由雷霽霖院士引進(jìn)我國，目前已成為我國北方沿海重要的工廠化養(yǎng)殖魚類。然而北方沿海夏季氣溫、水溫都比較高，大菱鲆發(fā)病率、產(chǎn)卵量和死亡率較高，損害養(yǎng)殖效益，不利于大菱鲆工廠化養(yǎng)殖的進(jìn)一步發(fā)展。本課題組從2007年開始對大菱鲆的耐溫性狀進(jìn)行遺傳改良，選育生長性能優(yōu)良的耐高溫新品系，目前已取得了可喜的進(jìn)展，選育后代耐溫性明顯提高。為加快育種進(jìn)程，挖掘與高溫應(yīng)答相關(guān)的
5、功能基因，解析大菱鲆應(yīng)答高溫脅迫的分子機(jī)制，本研究通過分析高溫脅迫條件下的皮膚組織轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)，篩選出數(shù)個(gè)與高溫脅迫相關(guān)的抗逆基因，利用基因克隆、組織表達(dá)分析和原核表達(dá)等方法進(jìn)行解析。以期在全基因組范圍內(nèi)了解大菱鲆應(yīng)答高溫脅迫的分子機(jī)制，為全面認(rèn)識(shí)大菱鲆抗逆的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)，并為大菱鲆耐高溫遺傳育種新標(biāo)記的開發(fā)提供新的理論基礎(chǔ)和研究方向。1.分析大菱鲆高溫皮膚轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行過濾，剔除了低質(zhì)量數(shù)據(jù)后將cleanreads進(jìn)行混合拼接，得到217609條Unigene作為參考序列用于后續(xù)分析；采用Nr，Nt，Sw
6、iss-Prot，KEGG，GO，KOG和Pfam七大數(shù)據(jù)庫對拼接的轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行功能注釋，并對Unigene進(jìn)行KEGG，GO和KOG功能分類；利用DESeq軟件對實(shí)驗(yàn)組和對照組的差異基因篩選，得到3497個(gè)差異基因，其中包括2043個(gè)上調(diào)基因和1454個(gè)下調(diào)基因。通過標(biāo)注的基因功能，進(jìn)一步篩選出10個(gè)與高溫脅迫相關(guān)的上調(diào)表達(dá)基因，設(shè)計(jì)簡并引物，PCR擴(kuò)增ORF序列，測序驗(yàn)證，得到6個(gè)序列正確的基因，分別為PDIA3、PDIA6、FTH1、HSP90β、SERPINH1、HSP70。2.利用RACE技術(shù)克隆上述6個(gè)基因，結(jié)果得到
7、大菱鲆PDIA3、PDIA6完整基因序列。其中PDIA3cDNA序列全長為2083bp，開放閱讀框?yàn)?479bp，5′非編碼區(qū)(UTR)和3′非編碼區(qū)分別為85bp和519bp；該基因ORF區(qū)可編碼一個(gè)由492個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量為54.92kD，理論等電點(diǎn)為5.40，包含一個(gè)由17個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽；目前該基因序列已經(jīng)提交至NCBI，I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文Genbank登錄號(hào)為MG765516。PDIA6基因cDNA序列全長為2018bp，其中開放閱讀框?yàn)?326bp，5′非編碼區(qū)(UTR)和3′非編
8、碼區(qū)分別為95bp和597bp；該基因ORF區(qū)可編碼一個(gè)由441個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量為47.72kD，理論等電點(diǎn)為5.01，包含一個(gè)由19個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽；目前該基因序列已經(jīng)提交至NCBI，Genbank登錄號(hào)為MG787152。3.通過qPCR分析6個(gè)
